脂肪干细胞对华勒氏变性早期雪旺细胞增殖与去分化影响的初步研究

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目的通过构建大鼠华勒氏变性体外模型,研究在周围神经系统华勒氏变性早期,SD大鼠脂肪干细胞对雪旺细胞增殖与去分化的影响。方法在无菌条件下从SD大鼠腹股沟取出皮下脂肪组织,采用I型胶原酶消化法分离提取大鼠脂肪干细胞并进行体外培养和传代,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况。通过流式细胞学鉴定其脂肪干细胞相关表面标记物。获取大鼠双侧坐骨神经制备大鼠华勒变性体外模型,并进行分组,实验组即是将大鼠华勒变性体外模型与脂肪干细胞进行非接触式共培养,对照组为单独体外培养的大鼠华勒变性体外模型。Real time PCR检测不同时间点(0h,24h,72h)实验组与对照组p75NTR和MPZ m RNA表达量。Western blot检测体外培养72h后实验组与对照组p75NTR和MPZ蛋白表达量。培养不同时间点(24h,48h,72h)后免疫组化染色法检测两组雪旺细胞增殖标记物Ki67的表达情况,Tunel法检测两组雪旺细胞的凋亡情况。结果成功分离培养SD大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪检测脂肪干细胞高度表达CD90,CD105,不表达CD34。Real time PCR结果显示体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去分化标记物p75NTR m RNA表达量逐渐增高,培养72小时后,实验组较对照组明显升高(p<0.05)。雪旺细胞分化标记物MPZ m RNA表达量则逐渐降低,且实验组降低趋势较对照组更加明显,培养72小时后,实验组MPZ m RNA表达量较对照组显著降低(p<0.001)。Western blot检测显示体外培养72h后实验组p75NTR蛋白表达量较对照组明显升高(p<0.05),而雪旺细胞分化指标MPZ的蛋白表达量较对照组显著降低(p<0.01)。免疫组化染色显示实验组Ki67表达量高于对照组,Tunel法染色显示实验组细胞凋亡率低于对照组。结论脂肪干细胞可以促进华勒氏变性中雪旺细胞的去分化,促进雪旺细胞增殖和抑制凋亡。
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