【摘 要】
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目的:1、探讨侧群细胞流式分析法在胶质瘤干细胞研究中应用;2、分析U251细胞系在干细胞培养条件下相关干细胞表型的变化;3、为分选胶质瘤干细胞提供方法学依据。方法:我们将U
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目的:1、探讨侧群细胞流式分析法在胶质瘤干细胞研究中应用;2、分析U251细胞系在干细胞培养条件下相关干细胞表型的变化;3、为分选胶质瘤干细胞提供方法学依据。方法:我们将U251胶质瘤细胞系由常规含血清培养转入无血清胶质瘤干细胞条件下培养,用流式细胞分析仪检测其侧群细胞(Side Population Cells,SP cells)比例的变化;并观察相应胶质瘤干细胞表型的变化,包括:表面标记物CD133表达的变化(流式细胞分析、免疫荧光检测);胶质瘤干细胞标记物Nestin的变化(免疫荧光检测);自我更新能力的变化(有限稀释法);肿瘤细胞的体内成瘤性变化(异种移植免疫缺陷鼠)。结果:1、U251细胞在常规含血清培养条件下,其SP细胞比例为0.54%±0.39%,转入无血清干细胞条件下培养3月后其SP比例升至5.51%±2.32%(P<0.05);2、在U251普通贴壁生长的细胞和干细胞培养条件下悬浮生长的肿瘤神经球中,经流式分析及免疫荧光检测均未见CD133(+)细胞;3、U251贴壁细胞中Nestin阳性细胞计数为8.17±3.74/HP,而其转入干细胞培养基中孵育3月后,其Nestin阳性细胞数升至37.39±6.31/HP(P<0.05);4、U251含血清培养的贴壁细胞与转入干细胞培养基培养3月的肿瘤神经球用有限稀释法比较其再次成球的能力,各细胞梯度间P均小于0.05,具有明显差异性;5、异种移植Balb/c免疫缺陷鼠,U251贴壁细胞组成瘤比例为6/12(只),而悬浮生长的肿瘤神经球组成瘤率为12/15(只),且肿瘤神经球组接种的Balb/c鼠神经症状出现时间早。结论:1、U251常规培养的贴壁细胞其SP比例极低,转入干细胞培养条件下培养3月后其SP比例显著增加;2、U251细胞转入干细胞条件下培养后,随着SP细胞比例的增加,Nestin表达增加、自我更新能力增强、动物体内成瘤性相应增加;3、上述胶质瘤干细胞表型的变化不依赖于CD133的表达;4、U251在干细胞条件下培养后,侧群细胞及相应干细胞特性的变化是因为U251细胞系中内在的肿瘤干细胞成分的扩增,或者是体外条件下非肿瘤干细胞的逆分化现象,尚需进一步实验证明。
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