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研究发现,类风湿性关节炎的发病机制涉及到关节软骨细胞外基质(ECM)被一系列蛋白水解酶的降解过程,在这个过程中基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)发挥主要作用。MMPs家族是一类活性依赖于锌离子的蛋白水解酶,其中,MMP-1和MMP-9是降解ECM主要成分的重要酶。在传统中医学中,蜂毒(Beevenom)是治疗类风湿性关节炎相对有效的方式之一。蜂毒由各种肽类、酶类及其他非肽类组份混合而成,其中蜂毒肽(Melittin)是蜂毒的主要活性成分。在治疗类风湿性关节炎的过程,蜂毒肽与MMPs的表达之间可能存在着联系。因此,本实验通过脂多糖(LPS)或肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激小鼠单核巨噬细胞(Raw264.7)发生炎性反应,检测蜂毒肽对细胞中MMP-1和MMP-9表达水平的影响。[实验目的]研究蜂毒肽对MMP-1和MMP-9表达的影响。[实验方法]利用传代培养的小鼠单核巨噬细胞系Raw264.7细胞,采用MTT检测法,检测不同浓度LPS和TNF-α分别对细胞活力的影响,选择不影响细胞活力的LPS和TNF-α的最高浓度作为实验中的刺激浓度。应用ELISA技术,检测LPS或TNF-α刺激细胞后MMP-1和MMP-9分泌的水平变化，检测不同浓度蜂毒肽对细胞外MMP-1和MMP-9分泌的水平的影响。应用RT-PCR技术检测LPS或TNF-α刺激细胞后MMP-1和MMP-9mRNA表达水平变化,检测不同浓度蜂毒肽对细胞MMP-1和MMP-9mRNA表达水平的影响。[实验结果]LPS和TNF-α刺激Raw264.7细胞,能使细胞中MMP-1和MMP-9mRNA水平增加,细胞外MMP-1和MMP-9蛋白水平升高；蜂毒肽对细胞内MMP-1和MMP-9mRNA水平有显著的抑制作用,对细胞外MMP-1和MMP-9的表达水平也有显著的抑制作用。[实验结论]LPS或TNF-α通过刺激Raw264.7细胞产生炎性反应,使MMP-1和MMP-9表达水平增加。蜂毒肽对LPS或TNF-α刺激后细胞MMP-1和MMP-9mRNA水平增加和细胞外蛋白水平升高均有抑制作用,可能由此减少对类风湿性关节炎ECM的降解,发挥软骨保护作用。