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百合(Lilium),百合科多年生球根草本植物,是我国传统名花,适于做切花、盆花和园林布景。全世界有90多种,中国有46种18变种,其中原产36种15变种。中国野生百合存在大量变异、遗传多样性丰富,但目前很多资源没有得到利用,且破坏流失严重、多样性逐渐降低,亟待保护。针对这一问题,作者对东北长白山、云南以及陕西部分地区的百合资源进行调查和收集,采用组织培养方法对采集的全部种球进行保存并采用AFLP和cpSSR两种分子标记方法研究采集的50份样品的遗传多样性。主要结论如下。 1.二年来收集到东北长白山、云南大理、丽江、中甸以及陕西太白山的野生百合36种。采自三地百合数量分别为:8种、16种、7种,其余的5种来自北京、福建等地。调查中观察到由于人为挖取百合作食用、药用、观赏以及生境的进一步恶劣等原因,使得野外百合资源存在情况非常严峻。以东北情况最为严重,其次是云南,目前亟需对野生百合尤其是一些特有种进行保护。 2.为更好的利用百合资源,尤其是为百合育种提供理论依据,本研究采用AFLP以及cpSSR标记方法研究百合遗传多样性。针对AFLP反应体系对DNA及模板的质量的严格要求,作者对传统的CTAB法进行了改进,以降低DNA中蛋白质及多糖的含量;同时对酶切时间设置处理,建立并优化百合AFLP反应体系。本研究以麝香百合、窄叶百合两种百合为材料从60对EcoRI/MseI AFLP引物对组合中筛选11对扩增效果较佳的引物用于百合的遗传多样性分析,并最终选择5对多态率高可用于全部材料的引物,产生条带189条,多态性条带123条,多态率为65.07%。各种的多态率集中在28.04%-42.32%之间。根据所得数据,采用相应指标分析中国野生百合遗传多样性,为进一步的研究野生百合提供分子水平上的依据。 3.从12对其他种已经合成的cpSSR特异引物对中筛选4对引物用于百合叶绿体SSR分析,共产生条带数12条,多态率为100%。对所得数据进行聚类,分析起遗传多样性。采用cpSSR方法是对AFLP标记方法的一个补充,同时也验证cpSSR这一分子标记方法在观赏植物中的应用是可行的。 本研究首次采用AFLP标记方法分析百合遗传多样性反应体系并首次尝试将cpSSR分子标记方法应用到观赏植物中。对百合野生资源的收集、保存以及遗传多样性作了研究,为建立百合核心种质以及更好的利用资源打下基础。