论文部分内容阅读
背景：前列腺癌是常见的男性泌尿生殖系统肿瘤,据统计,2009年美国有192,280例前列腺癌新发病例,其中死亡病例为27,360例,发病率为美国恶性肿瘤发病率第一位,死亡率为第二位,仅次于肺癌。随着人口老龄化等因素,我国前列腺癌的发病率也呈上升趋势,由2000年的1.5/100,000上升到2005年的1.7/100,000。前列腺癌日益增长的发病率和死亡率不仅给患者带来严重的健康损害,而且也给家庭、社会带来严重的经济负担。前列腺癌形成是一个多因素和多阶段的过程,是环境危险因素和遗传因素共同作用的结果。流行病学研究显示：年龄、种族、家族史、饮食、激素水平和前列腺癌的发生密切相关。很多人具有或接触相同的致癌危险因素,但最终仅有少数人发生前列腺癌,提示个体易感性存在差异。具有生物活性的前列腺癌组织标本是进行前列腺癌分子生物学研究的基础,因前列腺癌组织以癌结节的形式存在于前列腺的内部,无论开放还是腹腔镜手术行根治性前列腺切除术均在前列腺外科包膜外进行,无法肉眼观察到癌组织,即使切开标本亦无法明确确定癌组织的准确位置,所以前列腺癌组织标本库的建立一直是泌尿系统肿瘤组织库中较为困难得一部分。近年来研究显示CYR61基因参与各种肿瘤的形成,在侵袭性的乳腺癌细胞中、胰腺癌细胞及儿科肿瘤中表达上调。而且实验显示CYR61在前列腺癌细胞的致瘤性和转移性上发挥重要作用。目的：1建立前列腺癌组织标本库。2.通过基因芯片研究揭示前列腺癌组织与良性前列腺病变、腹腔镜前列腺癌根治术与开放前列腺癌根治术基因表达差异研究。3.研究位于CYR61启动子区rs3753793基因多态性与中国汉族人群前列腺癌易感性之间的关联。方法：1.前列腺癌组织标本库的建立：与美国约翰·霍普金斯大学泌尿外科合作,在本院病理科协助下建立起一套有效的前列腺癌组织标本的留取方法,每份标本都有与之相对应的临床资料,并对患者定期随访,同时进行流行病学调查,调查内容主要包括一般情况、个人疾病史、家族史、生活习惯(包括吸烟、饮酒等)、主要环境危险因素暴露史、临床资料(包括PSA水平、Gleason评分、病理类型、临床分期、转移情况等临床常用诊断、治疗、转归指标资料)等。每位患者同时抽取5m1外周血,提取基因组DNA贮存于-20℃备用,癌组织标本贮存于液氮中。所有资料均录入数据库中,有专人负责保管,现已获取140余例前列腺癌组织标本,经取部分标本做冰冻切片HE染色和抽提RNA琼脂糖凝胶电泳实验,证实组织标本保存良好。2.全人类基因组基因芯片分析：共26份前列腺癌组织样品用于实验分析,其中包括8例行腹腔镜前列腺癌根治术,17例行开放手术,一例对照RNA样品来自美国约翰·霍普金斯大学泌尿外科,对照RNA样品来自因良性前列腺增生症行前列腺电切术的患者。我们设计2种常规颜色为着26份样品构筑基因表达图谱,共有44,000个基因表达被测定。通过使用标准局部加权最小平方回归法(LOWESS)使每一份样品基因表达图谱均标准化。数据使用美国Agilent技术公司GeneSpring软件进行分析,为测定两种手术方式对基因表达变化的影响,我们计算了变化的倍数和P值,比较前列腺癌组织与良性前列腺病变、腹腔镜前列腺癌根治术与开放前列腺癌根治术基因表达差异。3. CYR61基因多态性与前列癌易感性的关联研究：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法对位于CYR61启动子区rs3753793多态性进行基因分型,并利用实时定量RT-PCR来测定不同基因型前列腺癌组织的mRNA表达水平。结果：1.我科自2006年至今己收集前列腺癌组织标本141份,血标本835多份,每份标本都有一支相对应的临床资料,并对患者定期随访,所有资料均录入数据库中,有专人负责保管。我们选取部分组织样品抽提RNA,琼脂糖凝胶电泳后,可见明显的28 s和18 S条带,表明RNA保存比较完整。2.我们把表达差异2倍以上的75个基因/探针被分别被从来源于两种不同术式的样本中筛选出来,75个基因中67个在开放手术中表现为基因/探针上调,一些介导急性应激反应的基因如：FOSB、IER2、JUN、ATF3、FOS上调较明显,而通常一些在RT-PCR中做为对照的看家基因如GAPDH、HPRT1、TFRC、SF3A3并没有显示出不同表达。CYR61基因在前列腺癌组织中高表达。结论：1.成功建立人前列腺癌组织标本库。2.腹腔镜手术对前列腺癌组织标本的RNA并无负面影响,获自腹腔镜或是机器人辅助腹腔镜手术的前列腺组织标本能够满足分子生物学实验要求。和开放手术相比,腹腔镜手术标本仅仅是一小部分介导应激反应的基因表现出表达下调,其余并无较大影响,二氧化碳环境能够下调前列腺癌组织应激反应相关基因的表达。3. CYR61启动子区多态性位点rs3753793与中国人群中前列腺癌的发病率存在关联,GG型或GT/GG型携带者发生前列腺癌的危险性要明显低于TT型携带者。