【摘 要】
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敬钊缨毛蛛毒素-Ⅴ(chilobrachys jingzhao,JZTX-Ⅴ)是Kv4.3的一种专一性抑制剂,对表达在HEK293细胞上的野生型Kv4.3的IC5o值为10nmol/L。利用膜片钳检测发现,25 nmol/L JZTX
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敬钊缨毛蛛毒素-Ⅴ(chilobrachys jingzhao,JZTX-Ⅴ)是Kv4.3的一种专一性抑制剂,对表达在HEK293细胞上的野生型Kv4.3的IC5o值为10nmol/L。利用膜片钳检测发现,25 nmol/L JZTX-Ⅴ可以使野生型Kv4.3的稳态激活曲线和稳态失活曲线向去极化方向发生显著性漂移,而且可以显著延缓Kv4.3的激活和失活时间常数,但对失活恢复时间常数没有显著性影响,因此推断JZTX-Ⅴ是钾通道的一种门控调节型毒素。进一步将Kv4.3电压敏感区中S3b—S4上的氨基酸进行丙氨酸扫描,并研究JZTX-Ⅴ与这些突变体的相互作用,发现第282位的缬氨酸和第286位的苯丙氨酸是JZTX-Ⅴ与Kv4.3相互作用的关键残基。此外,通过建立吗啡成瘾小鼠模型,观察了JZTX-Ⅴ对纳洛酮催促戒断症状的治疗作用。结果表明JZTX-Ⅴ在戒断后的15min内能减少小鼠的跳跃次数,而且在1μg/20g和0.1μg/20g, 10μg/20g剂量下,JZTX-Ⅴ能有显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)的抑制跳跃次数的作用。根据这些现象和数据,JZTX-Ⅴ有希望成为一种戒毒先导分子。利用阳离子交换色谱和反相高效液相色谱,从广西雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)粗毒中分离纯化到一种神经多肽毒素,将其命名为雷氏大疣蛛毒素—Ⅶ(Raventoxin-Ⅶ)。运用MALDI-TOF质谱分析发现,它的精确相对分子质量为3158.155Da。利用Edman降解气相蛋白质测序仪测得其氨基酸序,其中有6个半胱氨酸形成3对二硫键。初步电生理实验表明,Raventoxin-Ⅶ对大鼠背根神经节(DRG)上的河豚毒素敏感型钠通道(TTX-sensitive Na+ channel)电流有抑制作用,其IC50值为12.2μmol/L,但对河豚毒素不敏感型钠通道(TTX-resistant Na+ channel)电流没有作用。
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