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蜘蛛抱蛋根状茎经磨碎、匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀得到粗品,粗品经DEAE-Sepharose,CM-Separose和SephacrylS-100分子筛层析得到蜘蛛抱蛋凝集素纯品(AEL)。分子量测定结果表明AEL是由大小为13.5和14.5 kDa的两个亚基组成的异源四聚体,其表观分子量为56kDa。AEL对兔血红细胞具有凝集作用,其最低凝集浓度为3.9μg/ml。AEL经不同温度处理后的凝血结果表明30℃至70℃范围内的温度变化对AEL的凝血活性没有明显的影响,当温度升高到80%时其凝血活性约丧失20%,当温度达到90℃时其凝血活性几乎全部丧失。pH对AEL,凝血活性的影响不大,其最适当pH为7-8。AEL经EDTA处理后其凝血活性基本未发生变化,表明其凝血活性并不依赖于金属离子。糖抑制实验结果表明甘露糖、甘露聚糖、甲状腺球带白和卵清蛋白对.AEL凝血活性具有抑制作用。变性剂Gdn-HCl对AEL的凝集活性影响较大,随着Gdn-HCl浓度的逐渐增加,其凝集活性逐渐降低,当Gdn-HCl浓度达到6M时AEL失去约80%的活性。低浓度的脲对AEL凝集活性基本没有影响,8M的脲也仅使AEL失去约20%活性,由此表明相同浓度的Gdn-HCl对AEL的变性作用强于脲。
天然AEL的荧光光谱研究表明AEL在280nm激发时其荧光发射光谱峰位在310 nm处,未见色氨酸(Trp)残基发射峰,说明Trp残基的荧光可能发生了从Trp向Tyr的能量转移;AEL在295nm激发时,其荧光发射光谱峰位在330nm处,与游离Trp残基的荧光发射峰位(348nm)相比蓝移了近18nm,说明AEL分子中Trp残基可能处于疏水的非极性环境而并未暴露在周围的溶剂中。AEL色氨酸修饰结果表明第一个和第二个色氨酸残基的修饰对AEL凝血活性没有影响。第三个色氨酸残基的修饰使AEL凝血活性丧失25%,而第四个色氨酸的修饰则使AEL凝血活性全部丧失,由此第三、四个色氨酸残基对AEL的凝血活性发挥起重要作用。特异性甘露糖的加入对NBS的修饰并没有起到保护作用,此结果证明色氨酸很可能不位于AEL的活性中心,但对于活性中心构象的维持其了至关重要的作用。精氨酸(Arg)、酸性氨基酸(Asp/Glu)、半胱氨酸(Cys)的修饰对于AEL的凝血活性都造成了不同程度的丧失,说明这些氨基酸是AEL发挥凝血活性所必需的。氨基酸修饰过程中进行的糖保护实验表明只有酸性氨基酸(Asp/Glu)可能位于AEL的活性中心,而其它被修饰的氨基酸并不位于AEL的活性中心,但可能位于活性中心附近参与了活性中心构象的维持。氨基酸修饰后AEL的远紫外CD谱显示精氨酸、色氨酸、半胱氨酸修饰后其CD谱发生了很大的变化,由此也说明这些氨基酸修饰造成的活性丧失或降低是由于修饰后二级结构发生的剧烈变化引起的。此外,酪氨酸和组氨酸的修饰对AEL的凝血活性没有任何影响说明这两种氨基酸不是AEL凝血活性所必需的氨基酸。天然AEL的远紫外(190-250hm)圆二色谱显示AEL在217nm处出现一大的负峰,与典型的β-折叠蛋白的远紫外圆二色谱非常相似,说明AEL二级结构可能主要由β-折叠组成。
丙稀酰胺、琥珀酰亚胺、碘化钾和氯化铯对AEL的淬灭结果表明在这四种淬灭剂中丙烯酰胺对AEL的荧光淬灭作用最强,其次是琥珀酰亚胺和碘化钾、氯化铯对AEL的淬灭作用最弱。AEL经盐酸胍变性后各种淬灭剂对AEL的淬灭作用都有明显的增强,这可能是由于AEL变性后大部分荧光基团暴露出来从而更好的与淬灭剂结合的缘故。特异性甘露糖的加入也使这四种淬灭剂对AEL的淬灭作用有明显提高。甘露糖与AEL结合后其荧光发射光谱峰位红移至360hm说明甘露糖与AEL结合后导致AEL的结构发生了较大变化,大部分荧光基团暴露出来。对于离子型淬灭剂碘化钾和氯化铯,在自然条件下碘化钾对AEL的淬灭程度比氯化铯强得多说明大部分的荧光基团可能处于正电环境铯离子难以与之接触。
AEL对肿瘤细胞的抑制实验结果表明AEL对肺癌细胞,乳腺癌细胞株和肝癌细胞三种肿瘤细胞的生长具有较高的生长抑制率,当AEL浓度为50 ug/ml时对这三种肿瘤细胞的抑制率分别为60%,66%和56%,这种抑制作用表现出明显的细胞特异性和浓度依赖性。另外,抗病毒试验测定结果显示AEL对水疱性口炎病毒、柯萨奇病毒B4和呼吸道合胞病毒感染HeLa细胞表现出较大的抑制作用,其半数抑制最低浓度均为4μg/ml,但AEL对呼肠孤病毒、辛德毕斯病毒没有抑制作用。