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原发性肝癌是我国发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一。临床上多数患者诊断时已属晚期,丧失了手术的机会。目前肝癌化疗效果不理想,多数化疗药物的毒副作用很大。研究治疗肝癌有效低毒性的药物和方法,提高肝癌治疗效果,改善其预后是我们医务人员的使命。近年来国内外学者研究发现白藜芦醇对胃癌,结肠癌,前列腺癌,肝癌,卵巢癌均有抑制作用,提示其在临床治疗肿瘤上具有广阔的前景。白藜芦醇(Resveratrol, Res)是广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中的一种多酚类化合物,最新研究指出其作为一种低毒的天然药物,能够通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡两种途径来抑制细胞增殖。PTEN基因(也称MMAC1或TEP1基因)是迄今发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因,它在细胞内信号传导通路的调控中起关键作用,不但参与正常细胞生长、发育的调控,而且在抑制肿瘤发生、发展及转移中起重要作用。PTEN抑制肿瘤的机制有:(1)它可通过拮抗Akt通路促进BAD和forehead的活性及抑制NF-κB的活性,最终诱导凋亡的发生。(2)PTEN可通过拮抗信号Akt通路激活forkhead,而发挥调控细胞周期的作用。(3)研究表明PTEN能选择性抑制整合蛋白介导的细胞黏附与迁移。(4)PTEN能抑制PI3K或Akt所诱导的广泛新生血管形成。Akt是一种原癌基因,因其与致小鼠白血病病毒癌基因v-Akt高度同源而得名,在细胞存活途径中起重要作用。Akt是细胞生存通路PI3K/Akt的关键分子,其持续活化与肿瘤的发生发展密切相关,PI3K通过磷酸化Akt,使Akt活化,活化的Akt再通过磷酸化MDM2, P21, cyclinD2, FXHR, TSC2, Foxo, bcl-2等多种作用底物,促进肿瘤细胞的生长、增殖,抑制细胞凋亡,促进细胞侵袭和转移,促进血管生成,抵抗化疗和放疗中细胞的凋亡。目前国内外研究发现白藜芦醇对肝癌细胞有抑制增殖及诱导凋亡作用,但白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡中PTEN、p-Akt所起的作用国内外未见报道。本研究通过体外人肝癌细胞株SMMC-7721培养,观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721中抑癌基因PTEN的表达以及对PI3K/Akt通路的影响,旨在探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖及促进肝癌细胞凋亡中PTEN及p-Akt的作用。目的:探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖及促进肝癌细胞凋亡中PTEN及p-Akt的作用方法:应用体外SMMC-7721细胞培养技术,采用MTT及集落形成实验测定白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖的影响;采用流式细胞仪及TUNEL染色测定白藜芦醇对SMMC-7721细胞凋亡的影响;通过免疫细胞化学法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞中凋亡相关基因PTEN和p-Akt的影响;采用RT-PCR法检测白藜芦醇干预前后人肝癌细胞株SMMC-7721的PTEN基因表达水平变化。结果:1白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖的作用:MTT法显示在12h时白藜芦醇对SMMC-7721细胞的增殖的抑制不明显,只有200μmol·l-1白藜芦醇对肝癌细胞有抑制作用,当培养时间延长至24h时,逐渐出现抑制作用,且浓度越高,时间越长,抑制作用越强。集落形成实验结果表明25μmol·l-1白藜芦醇对集落形成的抑制作用与对照组相比差异无显著性(P>0.05), 50μmol·l-1、100μmol·l-1、200μmol·l-1白藜芦醇对集落形成均有抑制作用,且随剂量增加,抑制作用增加,与对照组相比差异有显著性。2白藜芦醇对SMMC-7721细胞凋亡的作用:流式细胞术及TUNEL染色测定均显示25μmol·l-1藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖的促进作用与对照组相比差异无显著性(P>0.05),50μmol·l-1、100μmol·l-1、200μmol·l-1白藜芦醇组细胞凋亡均出现不同程度增加,呈量效依赖关系,与对照组相比差异有显著性3白藜芦醇对PTEN基因蛋白的影响:免疫细胞化学显示经50μmol·l-1、100μmol·l-1、200μmol·l-1白藜芦醇干预后,细胞内PTEN蛋白表达增加,且呈量效依赖关系。4白藜芦醇对Akt磷酸化水平的影响:免疫细胞化学显示经50μmol·l-1、100μmol·l-1、200μmol·l-1白藜芦醇干预后,细胞内Akt磷酸化下调,且呈量效依赖关系。5白藜芦醇对PTEN基因转录的影响:RT-PCR结果显示,经50μmol·l-1、100μmol·l-1、200μmol·l-1白藜芦醇干预后,PTEN基因转录水平上调,呈量效依赖关系。结论:白藜芦醇能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并且促进其凋亡,其机制可能与上调PTEN的转录及表达,和抑制Akt的磷酸化有关。