隐丹参酮在人肝癌HepG2细胞中的抗肿瘤作用机制

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隐丹参酮是丹参中的主要有效成分,它具有肿瘤抑制作用。本论文以人肝癌HepG2细胞株为试验材料,分别应用MTT比色法、AO/EB双染色法、RT-PCR技术,研究隐丹参酮对癌症的抑制作用机制,获得了如下结果:1)通过不同浓度的隐丹参酮刺激人肝癌HepG2细胞株6,12,18,24小时后分别用MTT比色法检测其OD值。结果显示,在其作用于细胞24h后,发现隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞的抑制效果比较明显,随着隐丹参酮浓度的增加,OD值逐渐减少,说明隐丹参酮已经开始发挥其抑制作用,并且呈一定的剂量相关性。隐丹参酮的半抑制浓度:IC50=94.6μM。2) AO/EB双染色法检测隐丹参酮对HepG2细胞凋亡效果,荧光检测结果可看出其中大多数细胞都被染上红色,只有少量细胞被染成绿色,说明隐丹参酮对HepG2细胞的抑制效果明显,推断隐丹参酮通过激发HepG2细胞的凋亡途径来达到抑制HepG2的效果。3)半定量RT-PCR检测p53、p21基因的表达量。用不同浓度的隐丹参酮刺激HepG2细胞24时后提取细胞总RNA,以此为模板进行RT-PCR,检测细胞在各浓度下p53与p21的mRNA表达量。因为GAPDH在细胞内稳定表达,以GAPDH作为内参,通过计算目的片断与GAPDH片断含量的比值,得出目的基因在总mRNA的相对浓度。根据实验结果,初步断定隐丹参酮对p21基因的刺激效果不明显,对p53基因的刺激效果比较明显。综上,本文探讨了隐丹参酮在人肝癌HepG2中的肿瘤抑制作用效果及相关的分子机制,隐丹参酮对p53基因的刺激效果比较明显,推断隐丹参酮通过作用于p53抑癌基因实现肿瘤抑制,其凋亡有待进一步研究。本研究为中药抗肿瘤研究提供了新的思路及方法。
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