百尾参抗氧化损伤药效物质基础及指纹图谱研究

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目的:选择抗氧化损伤活性评价百尾参的药效,明确百尾参的药效物质,并提升其质量标准。  方法:通过70%乙醇提取,D101大孔树脂柱层析,获得百尾参水组分、70%乙醇组分和90%乙醇组分,以过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞氧化损伤模型作为体外抗氧化损伤评价模型,筛选出百尾参抗氧化损伤有效组分,对其可能的作用机制进行初步探讨;采用MCI、Sephadex LH-20、正反相硅胶柱层析等分离纯化手段对百尾参化学成分进行研究,并采用 UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱学技术对化合物进行结构鉴定,并对部分分离得到的化合物进行抗氧化损伤活性评价;同时,采用UHPLC-DAD建立百尾参指纹图谱方法,并依据相关规定对30批药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属及有害元素和有机氯农药残留等与质量有关的检查项目进行研究。  结果:百尾参70%乙醇组分和90%乙醇组分能够保护 H2O2对PC12细胞造成的氧化损伤。利用现代的分离技术对活性较强且成分较丰富70%乙醇组分进行研究,从中分离鉴定了20个化合物。药理研究表明,部分化合物均具有抗氧化损伤活性。此外,通过对指纹图谱研究,利用相似度软件,聚类分析和主成分分析等统计方法建立百尾参药材指纹图谱研究方法,结果显示其相似度在0.7~0.9,聚类分析将30批样品指纹图谱分为4类,且主成分分析提示1号峰和Disporumone A为百尾参质量控制中的关键性指标;其它质量相关的研究结果显示,百尾参水分、总灰分、酸不溶性灰分分别不得超过14.0%、6.0%、2.0%;百尾参中铅、镉、铜、砷、汞含量均符合外贸易经济合作部“药用植物及制剂进出口绿色行业标准”;百尾参均未检出9种有机氯残留农药。  结论:70%乙醇组分和90%乙醇组分是百尾参的抗氧化损伤主要有效组分。它们能通过保护细胞免受氧化损伤并直接清除氧化自由基离子而对炎症细胞的产生保护作用。在所分离鉴定的化合物中,Disporumone A(4)为一新化合物;(E)-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-丁烯-2-酮(1)、丁香醛(2)、香草醛(3)、覆盆子酮(5)、4,5-二羟基-3,6,7-三甲氧基黄酮(6)、4-(对羟基苯基)-3-丁烯-2-酮(8)、猫眼草酚(10)、dihenzo[b,f][l,5]dioxocin(12)、4-羟基苯乙酮(13)、紫丁香酸(15)、fareanol(16)、没食子酸乙酯(20)、4-hydroxy-2-methoxyphenyl-6-deoxy-α-L-talopyranoside(21)、(β,s)-Benzenepentanoic acid,β,4-dihydroxy-3-methoxy-methyl ester(22)为万寿竹属植物中首次报道的;药效评价实验结果表明,化合物1、3、4、10和18具有较强的抗氧化损伤作用;所建立的百尾参指纹图谱方法能特征性地区分药材真伪与优劣,可用于控制药材质量。研究工作同时初步阐明了百尾参抗氧化损伤药效物质基础。
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