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酵母双杂交系统(Yeast Two-hybrid System)是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法。该系统能迅速、敏感地在真核细胞体内检测蛋白生理状态下的互作,并可快速获得目的蛋白的编码基因,具有操作简便、灵敏度高的特点,已在植物病毒学的很多领域得到应用。本研究利用该系统对大麦黄矮病毒(Barley Yellow Dwarf Virus BYDV)和寄主小麦之间的相互作用进行研究,为该病毒运动模式研究进行初步探索。 根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(Coat Protein CP)和移动蛋白(Movement Protein MP)基因序列合成了CP,MP基因的上下游引物,通过PCR扩增获得目的片段,经过Sal Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序,构建了酵母表达载体pGBKT7-GPV-CP和pGBKT7-GPV-MP,用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白。 利用SD选择性培养基和酵母共转化阳性对照实验分别对酵母菌株AH109、Y187和载体pGADT7-Rec进行检测,结果表明,菌株和载体符合双杂交分析的要求。通过将pGBKT7-GPV-CP或pGBKT7-GPV-MP、小麦cDNA文库和pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞,铺在SD选择性培养基上筛选,半乳糖苷酶发色检测,结果未检测到相互作用的发生,说明小麦cDNA文库中可能没有与BYDV发生相互作用的寄主因子。利用酵母匹配进行筛选得出的结果与共转化筛选结果相一致,进一步证明了上述结论。