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背景手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是一种可以由多种肠道病毒（Enterovirus,EV）感染,以手、足、口等部位出现特征性皮损为典型症状的急性发热性疾病。其主要受累患者为5岁以下儿童,成人也可以感染。长期以来,HFMD被认为是一种温和的病毒感染,典型的临床表现在几天内自然消失,没有并发症,然而在过去的二十年中,HFMD受到了新的关注,因为有证据表明该病的临床、流行病学和病因特征与人们最初认识的有很大不同。在我国,山东省是HFMD较重的地区之一,而青岛地区地处临海,空气湿度大,有利于HFMD的流行,近年来暴发了多次HFMD疫情,其发病率远超山东省的平均发病率。因此阐明青岛地区HFMD临床特征、病原学特征、分子流行病学特征、基因重组,对于疾病的诊断、治疗和制定有效的防控措施具有重要意义。目的本研究通过对收集的2019年9月-2019年12月份青岛市妇儿医院与中心医院104份临床诊断为HFMD且病历完整的患者临床资料和咽拭子标本进行分析,了解其秋冬季HFMD患者临床特征、病原谱构成,并对CV-A6与CV-A16的基因特征和重组进行分析,研究其进化亲缘关系及目前流行的重组形式,为HFMD预防、诊断和治疗提供帮助。方法1.收集2019年9月-2019年12月青岛市妇儿医院与中心医院临床诊断为HFMD,且临床病历完整的病例104例。首先对104份临床资料进行统计学描述与分析,其次对CV-A6与CV-A16病毒引起的临床特征、实验室检查及生化检查结果进行分析比较。2.用针对所有型别EV的通用实时荧光定量PCR筛查出EV 阳性样本。对EV阳性样本使用针对部分VP1基因PCR扩增测序,进一步鉴定病毒型别。扩增CV-A6与CV-A16VP1片段全长,分析其同源性、进化关系和氨基酸变化。3.根据CV-A16与CV-A6进化树,扩增CV-A6和CV-A16 3D基因全长,并从GenB ank数据库中下载代表性的参考序列,构建系统发育树分析其3D区的重组形式。4.各选取8株CT值<30的CV-A6与CV-A16样本,进行病毒分离,病毒分离完成后用TCID50测病毒的毒力。结果1.本研究收集的数据显示,2019年秋冬季青岛地区HFMD的患病人群主要是5岁以下婴幼儿,占76.9%;男性多于女性,男女之比为2.47:1;在患者中散居儿童占72.1%;104例患者均表现为发热伴手、足、口等部位特征性皮损,有些患儿皮损累及四肢及躯干;出现神经系统症状的有77例,占74.04%。2.病原学检测结果显示,所有样本中EV阳性的为60份,阳性率为57.7%,其中CV-A6型28份,CV-A16型32份,未发现其他型别的病原。对两组型别之间的临床特征分析,未发现二者之间存在显著性差异。3.青岛地区CV-A6流行株属于D3基因亚型,CV-A16流行株属于Bla基因亚型和B1b基因亚型;CV-A6之间核苷酸和氨基酸同源性分别为93.6-100%、98.0-100%;与原型株Gdula（基因库序列号:AY421764）核苷酸和氨基酸同源性分别为82.5-83.8%、95.4-96.4%。CV-A16核苷酸和氨基酸之间的同源性分别为86.5-100%、98.0-100%;与原型株G-10（基因库序列号:U05876.1）核苷酸和氨基酸之间同源性分别为74.6-76.5%、91.2-92.3%。与原型株进行氨基酸变异分析,CV-A6均发生改变的位点有12个,Gln98Leu位处于BC环内,Gly160Ser、Ile174Va1 位于 EF 环。CV-A16 均发生改变的位点有 23 个,Ala213Glu、Pro215Leu、Ser217Ala、Ala220Leu 处于 GH 环。4.青岛地区流行的CV-A6重组形式为RF-A,CV-A16重组形式为RF-B和RF-D。5.成功分离到3株CV-A16和2株CV-A6;3株CV-A16的TCID50效价分别为:5 × 106.875/ml、5 × 107/ml、5 × 106/ml;2 株 CV-A6 的 TCID50 效价分别为:5 × 106/ml、5 × 106.25/ml。结论1.2019年秋冬季青岛地区HFMD患者主要由CV-A6与CV-A16感染引起,感染人群主要是5岁以下婴幼儿,且以散居儿童为主。患儿中男性多于女性。2019年秋冬季节HFMD患者中百分之74.04%的患者出现了神经系统症状,在未来秋冬季HFMD的流行需要密切关注。2.2019年秋冬季青岛地区流行的CV-A6为D3基因亚型,其核苷酸和氨基酸相对保守;CV-A16流行株属于B1 a基因亚型和B1b基因亚型,二者共同流行。与我国CV-A6和CV-A16目前流行情况一致。氨基酸序列变异分析表明CV-A6 VP1 BC环、EF环和CV-A16 VP1 GH环有的氨基酸位点发生了变化。3.2019年秋冬季青岛地区流行CV-A6重组形式是RF-A,CV-A16重组形式为RF-B和RF-D,与我国目前的流行重组形式一致。