车前子为车前科植物车前(Plantago asiatica L.)或平车前(Plantago depressa Willd)的干燥成熟种子,始载于《神农本草经》,味甘,性微寒。归肝、肾、肺、小肠经。具有利水通淋、清热明目及祛痰止咳等功效。对于车前子“味”的记载,《神农本草经》和2010版《中国药典》均只有“甘”一味,但在部分古籍也有所载的“甘咸”和“苦咸”两种“味”,如《新修本草》、《本草经集注》等。根据传统文献和现代药理学文献研究结果,车前子的解热、止咳、祛痰、免疫增强作用为其“甘”味的功能体现,利尿、免疫抑制作用为其“咸”味的功能体现。膜性肾炎是一种自身免疫性疾病,临床上主要表现为大量蛋白尿、水肿、高血脂等肾病综合征,目前治疗主要以免疫抑制剂为主。为了阐明车前子“味”的物质基础,本文选择体现车前子“咸”味利尿、免疫抑制功能的膜性肾炎模型考察车前子性味拆分组分“味”的归属。基于导师匡海学教授所提出的中药性味理论新假说,本课题组前期已将车前子水煎液拆分为成分之间互不交叉的多糖组分、脂肪油组分、黄酮组分、环烯醚萜组分和其他成分组分等5个组分,并进行了大量的性味药理学评价研究。本文针对车前子“咸”味所具有的利尿、免疫抑制功能,考察了车前子各性味拆分组分对膜性肾炎的治疗作用及相关机理,从而寻找其发挥作用的物质基础,为证实“新假说”的科学性提供一定的实验依据。研究结果具体如下:1.车前子性味拆分组分治疗膜性肾炎的药理作用研究选用改良的Border法应用阳离子化牛血清白蛋(Cationizationbovine serum albumin,C-BSA)复制大鼠膜性肾病模型(MN),通过光镜、电镜、免疫组化等实验方法,以病理形态学、免疫学、血液生化为指标,研究车前子各性味拆分组分对膜性肾炎的治疗作用。结果表明:车前子中脂肪油组分和多糖组分明显降低了膜性肾炎模型大鼠24h尿蛋白的量,升高血清中TP的含量;改善了膜性肾炎大鼠的血脂,降低血液屮TC、TG的含量;不同程度地降低血液中Scr、BUN的含量,改善了肾炎大鼠的肾功能;干预膜性肾炎大鼠免疫炎性细胞因子的表达,降低了血液中TNF-α、IL-1β以及TGF-β1的表达水平;改善了膜性肾炎大鼠肾脏病理变化,肾炎大鼠光镜下肾组织HE、PAS染色病变减轻,电镜下肾组织病变减轻;免疫组化方法检测表明,车前子脂肪汕和多糖可降低肾炎大鼠肾组织中TNF-α、IL-1β、TGF-β1、NF-KBp65的表达;多糖组分可明显提高血液中SOD的活力,降低MDA的含量,改善了膜性肾炎大鼠的抗氧化功能。结果显示车前子脂肪油和多糖对膜性肾炎具有明显的治疗作用。本研究结果显示“咸”味的物质基础为脂肪油组分和多糖组分,与前期车前子性味归属研究得到的结果相一致,为进一步证实“新假说”的科学性提供了实验依据。2.车前子多糖组分对免疫功能调节作用的研究车前子性味拆分组分中多糖为治疗膜性肾炎的物质基础,前期研究确定了车前子多糖组分对非特异性免疫,细胞免疫和体液免疫具有明显的抑制作用。本文旨在前期研究的基础上进行进一步的研究,探索车前子多糖发挥免疫作用的重要活性基团。本课题组前期已将车前子性味拆分组分中的多糖进行了分离和纯化,从中共分离得到7种纯多糖,均为酸性杂多糖且分子量较大。采用刀豆蛋白A(ConA)与LPS诱导的体外小鼠脾细胞增值实验来研究车前子总多糖(pp)、脱蛋白后的总多糖(pp-d)、7种酸性纯多糖(pp-1、pp-2、pp-3、pp-4、pp-5、pp-6、pp-7)及7种酸性纯多糖CMC还原产物(pp-1-Re、pp-2-Re、pp-3-Re、pp-4-Re、pp-5-Re、pp-6-Re、pp-7-Re)对免疫功能的影响,探讨多糖发挥作用的重要活性基团。结果表明:pp、pp-d体外均能抑制ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞增殖,但两者作用相差不明显;7个酸性纯多糖在不同浓度下均能抑制脾淋巴细胞增殖,但7个酸性纯多糖经过CMC还原制备成相应的中性杂多糖后,其体外对ConA和LPS诱导的脾细胞增值作用减弱或消失。说明车前子总多糖、脱蛋白总多糖和纯多糖无细胞毒活性,蛋白质不是多糖免疫作用的必要组分,推测糖链的结构是车前子多糖发挥免疫作用的重要活性基团,其中糖醛酸基团在多糖分子中为一个活性官能团,对车前子多糖的免疫活性发挥了极其重要的作用。其它官能团对多糖生物活性的影响,有待于我们今后对其进行更深入的研究。本文通过动物实验和细胞实验研究探索车前子多糖的药理作用,为进一步开发车前子多糖的临床应用提供实验依据;为进而研制出疗效好、毒副作用小、具有自主知识产权的多糖类中药创新药物提供不可或缺的科学依据。