基于细菌表面展示脱氢酶新型单糖电化学生物传感器的研制及应用

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本论文分为三部分,第一、第二部分通过利用物理包埋的方法实现了多壁碳纳米管和细菌表面展示脱氢酶的固定,分别构筑了木糖和葡萄糖电化学生物传感器;第三部分通过共固定细菌表面展示木糖脱氢酶和葡萄糖氧化酶,制备了一种同时检测木糖和葡萄糖的双酶电化学生物传感器。1、第一部分基于细菌表面展示木糖脱氢酶(XDH-bacteria)构建了检测D-木糖的电化学生物传感器。XDH-bacteria借助辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)催化木糖产生木糖酸内酯,NAD+被还原为还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。在MWNTs的作用下,NADH在电极表面发生电催化氧化,约+0.50V(vs. Ag/AgC1)处有明显的氧化峰。构筑的D-木糖电化学生物传感器表现出良好的分析性能,具有稳定性好、线性范围宽(0.6~100gM)以及检测限低(0.5州)等特点。该D-木糖电化学生物传感器可用于食品、纤维素降解产物等实际样品中D-木糖的测定。2、第二部分基于细菌表面展示葡萄糖脱氢酶(GDH-bacteria)发展了一种新型的生物电化学传感平台。Nafion-MWNTs膜具有良好的导电性和较高的催化性能,实现了选择性、灵敏检测D-葡萄糖。在最优化实验条件下,该葡萄糖电化学生物传感器对葡萄糖响应快速,具有线性范围宽(50-800μM)、检测限低(4μM)重现性良好以及抗干扰能力强等特点。3、第三部分通过物理包埋方法共固定XDH-bacteria和葡萄糖氧化酶(GOD),构筑了同时检测D-木糖和D-葡萄糖的双酶电化学生物传感器。该双酶生物传感器对木糖和葡萄糖电流响应快速,木糖线性范围为0.25-4mM,检测限为0.1mM;葡萄糖线性范围为0.25~6mM,检测限为0.1mM。该方法为进一步研究共检测固定奠定了良好的实验基础,在电化学传感器、生物传感器和电分析领域具有广阔的应用前景。
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