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肾缺血再灌注损伤是临床上常见的病理生理过程。在临床上,如急性缺血性肾功衰竭、心肺复苏、心脏体外循环、失血性休克、需暂时阻断肾血流的手术等,均可导致肾缺血再灌注损伤。银杏叶总黄酮(total flavonoid in leaves of Ginkgo biloba, TFG)为银杏叶的提取物,其药理作用广泛。TFG对心脏和脑缺血再灌注均有保护作用,但目前未见TFG防治肾IRI的相关报道。
第一部分、银杏叶总黄酮对肾缺血再灌注损伤大鼠的保护作用
目的:研究银杏叶总黄酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响。
方法:将50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)及TFG低、中、高剂量组(TFG-L组、TFG-M组、TFG-H组),每组10只。TFG低、中、高剂最组分别予TFG50、100和200mg/kg灌胃,每日3次,连续3d。末次给药12h后I/R组及TFG各剂量组采用央闭双侧肾动脉45min、再灌注24h制备急性肾IRI模型。采用化学方法测定各组血清肌酐(creatinine,Cr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE染色方法光镜下观察肾组织病理形态学改变并采用Paller法进行肾小管损伤评分。
结果:①I/R组血Cr和BUN水平、Paller评分明显升高,与Sham组比较有显著差异(P<0.01);TFG各剂量组的血Cr、BUN水平以及Paller评分均低于I/R组(P<0.05 or P<0.01),且三个指标与TFG剂量呈负相关(BUN:γ=-0.97,Cr:γ=-0.78,Paller评分:γ=-0.95,均P<0.01);②HE染色观察肾组织形态学改变显示I/R组有明显的肾小管上皮细胞水肿、空泡变性、管腔扩张、基底膜皱缩、核碎裂以及各种管型,TFG各剂量组上述病理改变明显减轻,尤其以TFG-H组更为明显。
结论:银杏叶总黄酮可降低大鼠肾IRI后血BUN和Cr水平,减轻肾小管损伤程度,对肾IRI具有保护作用。
第二部分、银杏叶总黄酮对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护机制
目的:探讨TFG对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用机制并寻求治疗肾缺血再灌注损伤的有效途径。
方法:采用夹闭双侧肾蒂致肾缺血45min后再灌注制作大鼠肾缺血再灌注损伤模型。将SD大鼠随机分为三组:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、银杏叶总黄酮预处理组(TFG组),每组又分为10min、30min、1h和24h四个时间点。测定血清Cr和BUN水平评价肾功能,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫印迹方法检测肾组织中JNK和p38MAPK的表达和磷酸化水平。
结果:①I/R组血Cr和BUN水平明显升高,与Sham组比较有显著差异(均P<0.01);TFG组血Cr和BUN水平明显低于I/R组(均P<0.01);②I/R组肾组织细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);TFG组比I/R组细胞凋亡指数显著降低(P<0.01);③I/R组在再灌注10min时磷酸化p38MAPK蛋白表达即开始有所增加,至1h时达高峰,24h已开始回落,但仍明显高于假手术组(P<0.01);TFG组各时间点均较I/R组表达减少,以30min时间点最为明显(P<0.01);三组各个时间点非磷酸化p38MAPK蛋白表达无明显差异(P>0.05);④I/R组从再灌注10min开始磷酸化JNK蛋白表达升高,30min达最高峰,1h和24h均有所下降但仍明显高于Sham组(P<0.01);TFG组各时间点均较I/R组表达减少,尤其30min最明显(P<0.01);三组各个时间点总JNK蛋白表达无明显差异(P>0.05)。
结论:TFG对肾IRI大鼠的保护作用可能与下调肾组织磷酸化p38MAPK和JNK的表达、抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。