近年来,世界各地肉制品掺假情况频繁发生。主要掺假方式是利用低价肉部分填充或全部替代高价肉,并在商品标签中不注明掺入的肉类成分。为保护消费者的利益,许多国家和地区都颁布了有关肉类产品标签的规定,也建立了许多动物物种鉴别方法,以配合相应法规的实施。但在目前的国家标准、行业标准或文献报道中,肉制品中动物物种成分的检测多集中在定性或半定量检测方面,随着掺假手段的不断变化,有效区分无意污染与非法添加的关键在于确定掺假比例。目前,市场上存在将猪肉、鸡肉、鸭等与羊膘混合或仅加入羊肉粉、香精等处理后羊肉进行销售,其中2013~2015年间中国深圳、山东、渤海、天津等地区的羊肉制品中均发现有鸡源性成分的存在,但现有技术只能定性检测。因此,急需建立一种稳定、准确、有效的定量检测羊肉中鸡肉质量百分比的方法,为执法监管部门提供具有说服力的检测结果,做到不错查、不漏查。本论文基于实时荧光定量PCR技术,建立了针对羊肉中鸡源性成分的定量检测方法,主要内容如下:(1)羊肉、鸡肉样品水分最佳干燥方法的研究本文针对羊肉、鸡肉的样品,利用直接干燥法和减压干燥法对样品水分进行处理,确定了一个有效的样品前处理方法。结果显示,直接干燥法处理时间最短,不影响样品核酸质量,确定为羊肉、鸡肉样品水分干燥处理的最佳方法。(2)羊、鸡源性成分特异性引物和探针的设计本文针对羊、鸡的单拷贝基因,设计了特异性引物和探针,成功建立了实时荧光定量PCR的定量检测体系。结果表明,设计的引物和探针具有良好的特异性,除目标物种外与其他成分均不发生反应,经退火温度优化检测体系扩增良好。(3)动物组织基因组DNA最佳提取方法的研究本文针对4种常用动物组织基因DNA提取的方法,比较确定了一个快速稳定优质的动物肉组织基因组DNA提取方法。结果表明,磁珠法结合全自动核酸提取仪提取的羊肉、鸡肉基因DNA质量最优、稳定性最高、提取时间最短。(4)实时荧光定量PCR对羊肉、鸡肉成分的定量检测研究本文运用实时荧光定量PCR技术与微滴式数字PCR技术,摸索了羊肉、鸡肉的质量与DNA含量与基因拷贝数之间的关系,以及DNA含量、基因拷贝数与Ct值之间的关系,比较了两者间数学模型的差异,建立了2种能实现定量检测羊肉中鸡肉质量百分比的方法,结果显示,基于DNA含量与基于基因拷贝数建立的数学关系,都具有良好的线性关系,R~2均大于0.99。(5)羊肉中鸡源性成分实时荧光定量PCR量化检测本文利用模拟混合样品和34份市售羊肉样品,验证了所建定量方法的实用性,结果表明,基于基因拷贝数建立的数学模型定量的稳定性、准确性更好,该方法对羊肉中鸡源性成分检测的最低检测限能达到5%(w/w),能够有效应用于羊肉制品中鸡源性成分的检测。综上所述,本论文基于基因拷贝数建立的实时荧光定量PCR定量检测方法,可实现对羊肉中掺假鸡肉成分的量化检测,能够作为区分故意添加和无意污染的依据,为执法监管部门提供有力的技术保障。