一、研究目的本项目研究以二甲基亚硝胺致大鼠肝纤维化模型为研究对象,观察甘草酸二铵抗肝纤维化的作用效果,并探讨其对肝组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达影响；体外实验评价甘草酸二铵对HSC-T6增殖和Ⅰ型胶原分泌和转化生长因子β1的影响。采用D—氨基半乳糖致小鼠化学性肝损伤模型,评价甘草酸二铵抗肝损伤的作用效果并探讨其作用机制,为甘草酸二铵抗肝纤维化和保肝治疗的临床应用进一步提供实验依据。二、实验内容1.甘草酸二铵对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的抑制作用采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型,以高剂量(60gmg/kg)和低剂量(15mg/kg)的甘草酸二铵进行干预治疗,并与秋水仙碱进行对照,检测大鼠肝功能、肝组织羟脯胺酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、血清透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)含量变化,观察肝组织病理学改变和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达。结果显示甘草酸二铵高、低剂量组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)水平均明显低于模型组,差异有显着性意义(P<0.01)。甘草酸二铵高剂量组大鼠肝组织的Hyp、MDA、血清HA和LN含量均明显低于模型组,差异有显着性意义(P<0.01),与秋水仙碱组比较,差异均有显著性意义(P<0.05,0.01)。甘草酸二铵高、低剂量组肝组织纤维化病变明显减轻、MMP-2表达明显增强,与模型组比较,差异均有显著性意义(P<0.01,0.05)。表明甘草酸二铵对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化形成具有明显的抑制作用,其机制与抗脂质过氧化损伤、保护肝细胞、增强肝组织MMP-2活性和促进细胞外基质降解有关。2.甘草酸二铵对HSC-T6增殖、Ⅰ型胶原分泌和转化生长因子β1的影响体外培养HSC-T6,采用MTT法检测甘草酸二铵对HSC-T6增殖的抑制作用,结果显示在20.0μg/ml以上浓度,甘草酸二铵均能显著抑制HSC-T6细胞的增殖,与细胞对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系。甘草酸二铵在作用HSC-T6细胞24h、48h、72h,其IC50分别为277.1μg/ml、160.71μg/ml、86.5μg/ml。体外培养HSC-T6,设细胞对照组,甘草酸二铵高剂量(320.0μg/ml)组、中剂量(80.0μg/ml)组和低剂量组(20.0μg/ml)组。采用ELISA法观察甘草酸二铵对HSC-T6细胞分泌Ⅰ型胶原和转化生长因子β1的影响。结果显示甘草酸二铵各剂量组均不同程度的降低培养上清液Ⅰ型胶原和TGF-β1水平,呈明显的量效关系,与细胞对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。3.甘草酸二铵对D—氨基半乳糖所致小鼠肝损伤的保护作用采用D—氨基半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤模型,以甘草酸二铵高、低剂量组(120gmg/kg,30mg/kg)作为治疗组,与联苯双酯(150mg/kg)对照,检测小鼠的血清ALT、AST及肝组织SOD活性和肝组织病理改变。结果表明,甘草酸二铵高、低剂量组血清ALT、AST活性降低、肝组织SOD活性升高,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05、0.01)。甘草酸二铵高剂量组与低剂量组比较,ALT、AST活性降低,肝组织SOD活性升高,差异均有显著性意义(P<0.01),但与联苯双酯组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。甘草酸二铵高、低剂量组肝细胞损伤程度明显减轻,肝组织病变明显改善。表明甘草酸二铵对D—氨基半乳糖致的小鼠肝损伤有较好的保护作用,其作用机制与抗自由基损伤有关。三、结论1.甘草酸二铵对二甲基亚硝胺所致大鼠肝纤维化形成有明显的抑制作用,其作用机制与抗脂质过氧化损伤、保护肝细胞、增强肝组织MMP-2活性和促进细胞外基质降解有关。2.甘草酸二铵对HSC-T6的增殖有明显的抑制作用,可明显抑制HSC-T6分泌Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达,从而抑制肝纤维化的形成。3.甘草酸二铵对D—氨基半乳糖所致的小鼠肝损伤有较好的保护作用,其作用机制与抗自由基损伤作用有关。