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脑多头蚴病又称脑包虫病,是多头带绦虫(Taenia multiceps)的中绦期幼虫(脑多头蚴Coenurusce cerebralis)寄生于羊和其他有蹄类动物的的脑、脊髓内,引起中枢神经系统的功能障碍的一种人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布,尤其以牧区较为常见。脑包虫病的药物疗法效果不稳定；手术疗法效果虽好,但仅适用于脑表层的包囊。随着人们对食品安全的关注和寄生虫耐药性的出现,免疫接种重新受到人们的重视。早期进行疫苗研究的抗原均为天然抗原,虽然对脑包虫的免疫预防有一定的效果；但是由于受抗原来源的限制,使其很难推广应用。在这种情况下,基因工程疫苗成为一个不错的选择。本研究根据已知的带科绦虫的18 kDa抗原基因的序列设计一对特异性引物,对多头带绦虫六钩蚴总RNA进行RT-PCR扩增,得到约552bp的目的片段。回收目的片段并克隆到PMD18-T载体上,序列测定结果显示本次实验首次扩增出了中国株多头带绦虫的18 kDa抗原基因,命名为Tm18。扩增的序列中包含完整的开放阅读框,编码由131个氨基酸组成的蛋白质。软件分析表明多头带绦虫四川株Tm18与国外报道的多头带绦虫土耳其株(序列号为EF672034)同源性为91.26%,氨基酸序列同源性为79.39%。根据获得的基因序列设计一对表达引物,构建原核表达质粒,转化表达宿主菌BL21(DE3)进行原核表达,同时对表达条件进行优化,确立了pGEX-4T-rTm18表达的最佳条件为37℃、0.6 mmol／L IPTG诱导8 h,融合表达的Tm18蛋白分子量为39.4kDa,并以不溶的包涵体形式存在于菌体中；免疫印迹表明该表达蛋白能与脑包虫病患羊血清相识别。纯化的重组蛋白与弗氏完全佐剂(FCA)混合液免疫接种小鼠后,用ELISA检测其特异性抗体水平的变化,Tm18组与对照组相比小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体显著升高。研究结果表明rTm18重组蛋白具有良好的免疫原性,可以作为免疫保护性抗原用于脑包虫疫苗的研制。