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背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是恶性度较高的肿瘤,慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝癌的重要危险因素。但不同个体对HBV感染所发生的免疫反应不同,临床转归多样,其中某些细胞因子单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)可导致机体免疫功能状态差异,对HBV感染病程和HCC发生有重要影响。本研究分为两个部分探讨细胞因子SNP与HCC关联,第一部分讨论了促炎细胞Thl细胞因子IL-2和IFN-γ基因多态性与HBV感染、HBV相关HCC的关系,并探讨肝癌危险因素与基因交互作用；第二部分联合促炎细胞Thl和抗炎细胞Th2分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、IL一1B和IL-6、IL-10基因,探讨其多态性与HCC的关系,为乙肝病毒感染和乙肝相关肝细胞癌患病风险评估及防治提供参考依据。第一部分Th1细胞因子IL-2、IFN-γ基因多态性与HBV感染、HBV相关肝细胞癌的关联研究目的分析细胞因子IL-2基因和IFN-γ基因部分位点单核苷酸多态性在广西人群中的分布频率和特点,探讨IL-2基因和IFN-γ基因与乙肝病毒感染、乙肝相关肝细胞癌发生的关系,以及吸烟、饮酒、肝癌相关家族史等肝癌危险因素与基因在乙肝病毒感染和乙肝相关肝细胞癌发生中的交互作用。方法采用医院为基础的病例对照研究方法,按照年龄、性别和居住地区频数匹配的原则,于2007年6月～2010年7月在广西医科大学第一附属医院和广西肿瘤医院收集375例HBV感染的HCC患者,同期在广西医科大学第一附属医院创伤手外科、脊柱骨髓外科、眼科收集377例HBV携带者,同期收集广西医科大学第一附属医院创伤手外科、脊柱骨髓外科、眼科和广西区医院体检中心406名一般对照,进行问卷调查,主要包括人口学资料和环境暴露资料,并通过门诊和住院病历补充生化指标和影像学检查。采用ABI平台的TaqMan MGB荧光定量PCR技术对IL-2基因-330A/C(rs2069762)位点和IFN-y基因-1615G/A(rs2069705)、+5171T/C (rs2069727)位点进行分型检测；应用SPSS16.0对资料进行分析,以Logistic回归模型分析组间基因-环境的交互作用,以交互作用指数S评价交互作用效果；用HaploView4.2检验研究样本的哈迪-温伯格遗传平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, H-W E)吻合度,并对IFN-γ两个位点进行连锁不平衡分析,以连锁不平衡系数D′评价遗传连锁效应。结果(1)本研究收集到符合条件、资料完整的研究对象共1158例,HBV-HCC病例375人,HBV携带者377人,一般对照406人,三组间年龄、性别、民族和婚姻状况均衡可比。肝癌危险因素吸烟史、饮酒史和肝癌相关家族史在三组间分布差异有统计学意义(P<0.05)。吸烟、饮酒和有肝癌相关家族史的健康人患HBV-HCC的风险OR(95%CI)分别为2.12(1.32-3.40)、3.41(2.14-5.42)、22.63(8.97-57.10),吸烟、饮酒和有肝癌相关家族史的HBV携带者患HBV-HCC的风险OR(95%CI)分别为1.52(0.97-2.38)、2.25(1.45-3.50)、41.34(12.80-133.45)。(2)HBV-HCC患者肝功能受损较为严重,除总蛋白外肝功能指标与两个对照组差别有统计学意义,而HBV携带者肝功能受损程度较低,仅白蛋白、谷丙转氨酶和碱性磷酸酶与健康人相比差异有统计学意义。(3) IL-2基因-330A/C(rs2069762)位点和IFN-γ基因-1615G/A(rs2069705)、+5171T/C(rs2069727)位点的基因型在HBV-HCC患者、HBV携带者和一般对照中分布差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)IFN-γ的-1615G/A和+5171T/C位点存在连锁不平衡(D’=0.976,r2=0.549,P=2.22-16),单倍型GC在人群中出现的频率<0.03,其余3种单倍型GT、AT、AC频率在病例组和总对照组(HBV携带者+一般对照)间分布差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)吸烟与IL-2-330A/C、IFN-γ-1615G/A和IFN-γ+5171T/C位点对HBV-HCC发病、HBV感染的交互作用均为负交互(S<1)。饮酒与IL-2-330A/C位点对HBV-HCC发病、HBV感染的交互作用均为正交互(S=1.41、1.59、1.77),饮酒联合IL-2-330C等位基因能增加HBV-HCC患病、HBV感染风险；饮酒与IFN-γ1615G/A和+5171T/C位点对HBV-HCC发病的交互作用均为负交互(S<1),对HBV感染的交互作用均为正交互(S=2.89、1.39),饮酒联合IFN-γ-1615A等位基因和IFN-γ+5171C等位基因能增加HBV感染风险。无论是否携带HBV,肝癌相关家族史与IL-2-330位点、IFN-γ-1615和+5171位点对HBV-HCC的发生有协同作用。结论(1)IL-2基因-330A/C(rs2069762)和IFN-γ基因-1615G/A(rs2069705)、+5171T/C(rs2069727)位点的等位基因和基因型频率在HBV-HCC组、HBV携带者组和一般对照组中分布差异无统计学意义。(2)吸烟、饮酒和有肝癌相关家族史是患HBV-HCC的重要危险因素。(3)上述位点的基因多态性与环境暴露因素存在交互作用,突变型基因不是广西人感染HBV和患HBV-HCC的直接危险因素,但与环境危险因素可能协同促进HBV感染和HBV-HCC发生第二部分Thl/Th2主要细胞因子联合作用与原发性肝细胞癌易感性分析目的根据Thl和Th2的主要细胞因子部分位点的单核苷酸多态性在广西人群中的分布频率和特点,探讨Th1和Th2细胞因子基因-基因联合作用与原发性肝细胞癌发生的关系。方法采用医院为基础的病例对照研究方法,按照年龄、性别和居住地区频数匹配的原则,于2007年6月～2010年7月在广西医科大学第一附属医院和广西肿瘤医院收集720例HCC患者,同期收集广西医科大学第一附属医院创伤手外科、脊柱骨髓外科、眼科和广西区医院体检中心848人作为对照组,进行问卷调查,主要包括人口学资料和环境暴露资料,并通过病历补充生化指标和影像学检查。采用ABI平台的TaqMan MGB荧光定量PCR技术对IL-2基因-330A/C(rs2069762)位点、IFN-y基因-1615G/A(rs2069705)和+5171T/C(rs2069727)位点、IL1B基因-31A>G(rs1143627)和-511G>A(rs16944)位点、IL-6基因-572C>G(rs1800796)位点、IL-10基因-592A>G(rs1800871)和-819T>G(rs1800872)位点进行分型检测；应用SPSS16.0对资料进行分析,计量资料的比较采用t检验,计数资料的比较采用卡方检验,用非条件Logistic回归模型计算相对危险度。用HaploView4.2检验研究样本的哈迪-温伯格遗传平衡吻合度。结果(1)本研究收集到符合条件、资料完整的研究对象共1568例,HCC病例720人,一般对照848人,组间年龄、性别和民族均衡可比。性别是HCC患病的危险因素,男性患病的相对危险度是女性的1.54倍(95%CI：1.10～2.16)。吸烟史、饮酒史、肝癌相关家族史和HBV感染是HCC患病的重要危险因素,相对危险度OR(95%CI)分别为2.10(1.49-2.96)、2.52(1.79-3.54)、25.82(11.63-57.34)、5.96(4.60-7.74)。(2)IL-2基因-330A/C(rs2069762)位点、IFN-γ基因-1615G/A(rs2069705)和+5171T/C(rs2069727)位点、IL1B基因-31A>G(rs1143627)和-511G>A(rs16944)位点、IL-6基因-572C>G(rs1800796)位点、IL-10基因-592A>G(rs1800871)和-819T>G(rs1800872)位点的等位基因和基因型频率在HCC患者和无肿瘤对照中分布差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)病例组和对照组间Thl和Th2危险基因型携带情况分布差异有统计学意义,并且随着Thl和Th2危险基因型携带数目增加,HCC患病风险增高(Ptrend<0.05)。携带2-3个Thl危险基因型的人患HCC的风险是携带最少数目者(0～1个)的4.33倍(95%CI：2.67-7.02),携带4-5个Thl危险基因型携带者患HCC的风险是最少数目携带者的6.14倍(95%CI：3.17～11.92)。携带2-3个Th2危险基因型的人患HCC的风险是最少数目携带者(0-1个)的1.51倍(95%CI：0.96-2.37)。(4)在壮族、饮酒者和没有肝癌相关家族史的人中,Thl和Th2危险基因型分别在病例组和对照组中分布差异有统计学意义,并且随着危险基因型携带数目的增加而危险度增高(Ptrend<0.05)。在男性、汉族、不饮酒、不吸烟者和HBsAg阳性者中,仅Th1危险基因型分别在病例组和对照组中分布差异有统计学意义,并且随着危险基因型携带数目的增加而危险度增高(Ptrend<0.05)。无论是否吸烟或HBsAg阳性,随着Thl危险基因型携带数目的增加而HCC患病风险增高(Ptrend<0.05)。(5)与最少数量Th1和Th2危险基因型的携带者相比,携带危险基因型越多则患HCC风险越大(Ptrend<0.05)。同时携带4-5个Thl危险基因型和2-3个Th2危险基因型的人患HCC的风险是最低数目携带者(同时携带0-1个Thl和0-1个Th2危险基因型)的23.42倍(95%CI：3.73-146.92)。结论(1)Thl细胞因子IL-2基因-330A/C(rs2069762)位点、IFN-γ基因-1615G/A(rs2069705)和+5171T/C(rs2069727)位点、IL1B基因-31A>G(rs1143627)和-511G>A(rs16944)位点,以及Th2细胞因子IL-6基因-572C>G(rs1800796)位点、IL-10基因-592A>G(rs1800871)和-819T>G(rs1800872)位点的单核苷酸多态性在广西HCC患者和健康人中分布差异无统计学意义。(2)Th1和Th2危险基因型携带数目在组间分布差异有统计学意义,HCC患病风险可能随着危险基因型携带数目增加而增高。Th1-Th2联合作用可能增加HCC患病风险。