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目的:初步研究赖氨酸特异性脱甲基酶1(LSD1)抑制剂反苯环丙胺对肾透明细胞癌786-O细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其机制。方法:1、细胞活力实验:细胞培养成功后行MTT实验检测不同浓度梯度下的反苯环丙胺(TCP)干预对数生长期的786-O细胞24h、48h和72h后的细胞生长抑制率,并设调零孔和对照组,计算50%致死浓度(IC50),然后绘制浓度-时间抑制率曲线图;实验重复3次。2、采用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)分析、计算细胞凋亡率,并绘制曲线图。3、Trizol法提取实验组和对照组细胞总RNA,应用分光光度计法检测RNA浓度、纯度,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,使用半定量RT-PCR检测LSD1基因mRNA的表达量变化。4、Western-blot检测实验组和对照组细胞LSD1蛋白表达量变化。5、采用划痕试验观察TCP对786-O细胞迁移力的影响,拍照观察12h、24h和48h细胞迁移距离。实验重复3次。6、Transwell细胞体外侵袭实验检测不同浓度梯度的TCP作用对数生长期的786-O细胞24h侵袭到Tanswell小室下室面的数目,同时设立对照组,予以0.1%的结晶紫染色后拍照。实验重复3次。7、数据统计分析:所有数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS19.0统计软件包的单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义;以P<0.01为差异有显著统计学意义;以P>0.05为差异无统计学意义。结果:1、不同浓度(0、10、20、40、80、160和320uM)的TCP作用于786-O细胞24h、48h和72h后,MTT法检测结果显示,1‰的DMSO溶液对786-O细胞无影响,TCP对786-O细胞的增殖有抑制作用,10uM以上随药物浓度的增大、作用时间的延长,抑制作用随之增强,呈现明显的时间-剂量效应关系(P<0.01)。计算出24h、48h和72h TCP的IC50值分别为133.76uM、67.66uM和36.02uM。2、流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法检测药物诱导细胞凋亡分析表明,TCP作用肾癌786-O细胞48h,0uM组、DMSO组和10uM组两两比较,凋亡率无统计学差异(P>0.05),40uM-160uM组随浓度的增高,早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例都逐渐增加,与对照组相比差异具有显著统计学意义(P<0.01)。同时,细胞坏死率也同步增高,说明TCP具有细胞毒性作用,随药物浓度增高,毒性随之增大;3、 TCP处理786-O细胞48h后LSD1基因mRNA表达量的分析,40uM和80uM组的表达明显低于0uM组及1‰DMSO组LSD1基因mRNA表达量(P<0.01);0uM组与1‰DMSO组比较,结果无明显差异(P>0.05);4、Western-blot分析TCP处理细胞48h后LSD1蛋白在786-O细胞中的表达情况,40uM和80uM组的表达明显低于0uM组及1‰DMSO组LSD1蛋白表达量(P<0.01);1‰DMSO组与0uM组比较,结果无明显差异(P>0.05);5、采用划痕试验观察TCP对786-O细胞迁移力的影响,结果显示:0uM组24h及48h愈合率分别为35.14%±3.91%、59.46%±4.36%;1‰DMSO组24h及48h愈合率分别为38.12%±3.86%、56.52%±4.68%;40uM组处理24h后愈合率为28.64%±3.15%、处理48h愈合率为39.72%±4.11%;80uM组处理24h愈合率为21.11%±4.18%、处理48h愈合率为30.81%±3.74%。TCP处理786-O细胞后,细胞的迁移能力明显低于0uM组和1‰DMSO组,差异有统计学意义(P<0.05)。0uM组和1‰DMSO组比较,迁移力无明显差异(P>0.05)。表明TCP处理后786-O细胞迁移能力明显下降,且与时间和浓度呈正相关,1‰DMSO对786-O细胞的迁移力无影响;6、应用Transwell小室检测TCP对肾癌786-O细胞侵袭能力的影响,TCP以40、80uM作用肾癌786-O细胞24h,对照组(0uM组、1‰DMSO组)亦作用24h。结果发现0uM组、1‰DMSO组两两比较,侵袭到平铺基质胶的Transwell小室下室面的细胞数无明显差异,分别为286.25±25.81和294.82±24.36,说明1‰DMSO对768-O细胞的侵袭能力无明显影响;40uM和80uM组侵袭到小室下室面的细胞数分别为195.86±19.43和115.76±18.56,表明随浓度的增高,穿过Transwell小室膜的细胞数逐渐减少,细胞的侵袭力逐渐下降(P<0.05)。与对照组相比差异具有显著性(P<0.01)。说明TCP对786-O细胞侵袭数目的抑制呈浓度依赖性。结论:1、LSDl抑制剂TCP在体外可以抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖,且呈浓度-时间依赖性;2、TCP可以诱导体外培养的肾透明细胞癌786-O细胞凋亡,且呈浓度依赖性;3、TCP可以抑制LSD1基因mRNA和蛋白的表达;4、TCP在体外可有效抑制肾透明细胞癌细胞786-O的迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。