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热休克蛋白作为分子伴侣,参与维持细胞蛋白质空间构象,促进变性蛋白质修复,增加细胞抵抗力。本试验选取绍兴鸭HSP60、HSP70、HSP90基因进行cDNA序列克隆,用荧光定量方法检测HSP基因在不同组织中、不同热应激状态下的表达情况,运用RNAi方法研究HSP基因在肝细胞中对细胞凋亡相关基因的调控作用,运用iTRAQ分析热应激对肝脏差异蛋白表达的影响。主要结果如下：1) HSP60cDNA序列全长2027bp (GenBank accession number:JQ669386),其中包括58bp的5’UTR、262bp的3’UTR和1707bp的编码区(CDS),翻译编码569个氨基酸。HSP60氨基酸序列与红色原鸡同源性为93.1%,与火鸡同源性为92.6%、与斑马雀同源性为90.9%；绍兴鸭HSP70基因cDNA序列全长1532bp,包括68bp的5’UTR、339bp的3’UTR和1125bp的编码区(CDS),翻译编码375个氨基酸。HSP70氨基酸序列与火鸡同源性为99.5%、与红色原鸡同源性为99.4%,与珍珠鸡和鹌鹁同源性为99.2%；绍兴鸭HSP90基因cDNA序列全长为1350bp,包含251bp5-UTR、214bp3-UTR与1086bp CDS,编码362个氨基酸。HSP90氨基酸序列与斑胸草雀、红色原鸡、火鸡同源性均达到100%、与日本鹌鹑同源性为99.7%。2) HSP60、HSP70和HSP90基因在整个绍兴鸭孵化期均低水平mRNA表达;正常情况下,绍兴鸭HSP60mRNA在肝脏表达量最高,HSP70和HSP90mRNA在心脏中表达量最高；持续性热应激时,HSP60mRNA在心脏、肝脏、肾脏、脾脏与胰腺5种组织中的表达量增加,HSP70mRNA在心脏、肝脏、肾脏、脾脏4种组织中的表达量增加,HSP90mRNA在心脏、肝脏中表达量增加；急性热应激时,HSP60、HSP70mRNA在心脏、肝脏2种组织中表达量升高,HSP90mRNA在心脏、肝脏、肾脏3种组织中表达水平升高；心脏HSP60mRNA热应激恢复2小时后表达量降至正常水平,心脏和肝脏HSP70mRNA表达热应激恢复2小时降至正常水平,心脏和肝脏HSP90mRNA热应激恢复3小时后降至正常水平。3)用RNAi方法对鸭肝细胞HSP基因表达进行干涉,发现HSP60mRNA表达量降低了75.69%,同时CCO基因表达量升高704.7%、SAPK基因升高4325%、PKB基因降低95.9%；HSP70表达量降低了80.0%,CCO基因表达量升高1133.2%、TRAIL基因表达量升高146.2%、SAPK基因表达量升高82.4%、PKB基因表达量降低98.4%；HSP90表达量降低了80.0%,CCO基因表达量升高892.6%、SAPK基因表达量升高3502.1%、PKB基因降低97.8%。4) iTRAQ鉴定出98个热应激表达差异蛋白,其中57个蛋白表达上调,41个蛋白表达下调。GO注释和Pathway富集分析表明这些蛋白主要是与糖酵解和糖异生、三羧酸循环和丙酮酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸生物合成、细胞粘连等生物过程或功能相关,蛋白质相互作用网络表明热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白90(HSP90)是最核心的蛋白。