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目的：建立针对mTORC2特异性的下游靶点p-AKT (Ser473)的细胞分子模型,与华北制药新药研究开发公司合作,从微生物菌种代谢文库中筛选出mTORC2特异性的天然小分子抑制剂；方法：以mTORC2特异性的下游靶点p-AKT (Ser473)为第一轮的筛选靶点,分别以DMSO、Rapamycin、PI-103、HRP作为阴性对照、激活性阳性对照、抑制性阳性对照和底物空白对照,在正常的支气管上皮细胞系BEAS-2B中进行Cytoblot筛选。每种样品设计8种浓度梯度,各梯度之间呈3倍稀释。第一批检测样品为华北制药新药筛选中心拥有的1693种单体化合物；结果：将信号值低于PI-103孔或相当,重复性和浓度依赖性好的样品,进一步进行Western验证,获得3种对p-AKT (Ser473)有抑制活性的小分子抑制剂；将信号值高于Rapamycin或相当,重复性和浓度依赖性好的样品,同样进行Western验证,获得1种对p-AKT (Ser473)有激活作用的小分子激动剂；结论：针对p-AKT (Ser473)磷酸化水平的Cytoblot筛选方法,是一种基于活细胞整体,简单、快捷、灵敏度和特异性都比较高的方法,可以作为一种筛选mT0RC2特异性抑制剂的初筛模型；目的：初步探讨小分子化合物HA选择性诱导Rictor蛋白发生降解的分子机制，为筛选mTORC2特异性抑制剂提供一种新的思路；方法：Western进一步检测HA对多种肿瘤细胞中Rictor蛋白的影响；在HA诱导的Rictor蛋白降解的同时，加入蛋白酶体抑制剂MG-132，抑制蛋白酶体降解途径，发现Rictor蛋白的降解可以被逆转；将Rictor分成5段，分别构建GST融合蛋白，建立体外泛素模型，进一步确证Rictor蛋白可以被泛素化修饰；结果：HA可以选择性的诱导MM细胞中Rictor蛋白发生泛素．蛋白酶体途径降解；同时不会诱导mTOR蛋白和mTORC1复合体中的Raptor蛋白发生降解；在HA诱导的Rictor蛋白降解模型中，可以看到：Rictor蛋白被降解，mTORC2功能受抑，其特异性的底物p-AKT(Ser473)位点磷酸化水平降低；加用蛋白酶体抑制剂时，逆转Rictor降解，p-AKT(Ser473)位点磷酸化水平得以恢复；体外泛素模型中，发现Rictor蛋白可以被泛素化修饰；结论：基于HA诱导Rictor蛋白的降解现象，深入研究选择性降解Rictor蛋白的分子机制，将为筛选mTORC2特异性抑制剂提供一种全新的策略。