吩噻嗪类光敏剂介导的光动力抗菌疗法对白色念珠菌的杀伤作用研究

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目的通过比较不同吩噻嗪类光敏剂介导下的光动力抗菌疗法(APDT)对白色念珠菌的体外杀伤作用,为临床选择高效适宜的光敏剂提供理论基础。探讨APDT对艾滋病(AIDS)患者合并口腔白色念珠菌感染的真菌治疗效果方法第一部分为体外实验,选取白色念珠菌标准株DAY286为实验对象,将其制备成浓度为107个/mL的细胞悬液。实验分为四组:对照组、光动力组(APDT组)、光照组和光敏剂组。(1)对照组:既不加入光敏剂,也不予以光照射。(2) APDT组:将白色念珠菌细胞悬液分别与不同浓度的吩噻嗪类光敏剂亚甲蓝(MB)、甲苯胺蓝(TBO)、新亚甲蓝(NMB)及二甲基蓝(DMMB)避光混合孵育30min,再予以同等能量不同波长的光源照射。(3)光照组:不加入光敏剂,仅予以同APDT组相同能量和波长的光源照射。(4)光敏剂组:仅加入浓度相同的光敏剂MB、TBO、NMB及DMMB,不予以任何光照。用菌落形成单位(CFU)测定各组处理后白色念珠菌的存活菌落数。第二部分为临床研究,根据体外实验结果选取对白色念珠菌杀伤作用最强的DMMB为光敏剂,选取31例AIDS合并口腔白色念珠菌感染者为受试对象。治疗前嘱受试对象用0. 1mmol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)含漱10s,将浓度1. 2mmol/L DMMB均匀涂擦到受试者口腔黏膜病变处避光孵育3min,然后用波长635nm的激光光源照射口腔30mim,连续治疗3天。直接镜检法测定治疗前后白色念珠菌细胞数,用每次治疗后白色念珠菌数与治疗前白色念珠菌数的比计算白色念珠菌的生存率。结果(1)光敏剂浓度15μmol/L时,不同吩噻嗪类光敏剂(MB、TBO、NMB、DMMB)介导的APDT作用下,白色念珠菌菌落数生存率分别为78.38%、68. 47%、62. 37%、0. 0001%,差异有统计学意义(P<0. 05)。在浓度为0.1~15μmol/L时,DMMB浓度越高,APDT对白色念珠菌的的杀伤作用越强(P<0.05)。在浓度为5~100μmol/L时,TBO和MB的介导的APDT对白色念珠菌菌落数的杀伤作用与光敏剂浓度正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。光敏剂组、光照组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0. 05)。(2)AIDS合并的口腔白色念珠菌病患者予以光敏剂DMMB介导的APDT治疗1次后的白色念珠菌数与治疗前相比,生存率为49. 34%;治疗第2次后的白色念珠菌的生存率为35. 58%;第3次后白色念珠菌的生存率为24. 45%,治疗前后各组白色念珠菌数之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。所有受试者未见明显的不良反应和后遗症。结论(1)吩噻嗪类光敏剂中DMMB对白色念珠菌的体外杀伤作用最强,且在一定浓度范围内,DMMB、TBO和MB的抗菌活性与光敏剂浓度成正相关。(2) DMMB介导的APDT对AIDS患者合并的口腔白色念珠菌感染有杀伤作用。
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