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目的:糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes Mellituse,DM)最常见的严重微血管并发症之一。近年来研究发现,氧化应激、炎症反应和纤维化在糖尿病肾病发生发展过程中发挥了重要作用。糖尿病时机体处于氧化应激状态,通过产生过多的活性氧簇(Reactive Oxygen Species,ROS)直接损伤机体蛋白质和核酸等生物大分子,还可通过激活多功能转录调节因子NF-κB(Nuclear Transcription FactorκB),促进多种炎症因子、巨噬细胞及促肾脏纤维化关键因子TGF-β等的过度表达,共同导致肾脏病变。如何阻断或抑制氧化应激及炎症反应,减缓肾脏纤维化成为预防和治疗DN的关键。瑞格列奈(Repaglinide,RE)是一种非磺酰脲类促胰岛素分泌剂,是Ⅱ型糖尿病患者临床一线口服降糖药物,可有效控制餐后血糖。有研究报道,RE还可减缓DN进展,但确切机制尚不明了。本课题拟通过建立链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的DM大鼠模型,测定大鼠肾脏组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)活性,应用免疫组织化学、实时定量荧光PCR(real-time FQ-PCR)等方法检测肾组织中NF-κB、TGF-β表达情况,并予瑞格列奈(Repaglinide,RE)2mg/Kg进行干预,观察DM大鼠肾脏组织内氧化应激、炎症反应及纤维化状况,并探讨瑞格列奈对其存在的干预作用及机制,为人类糖DN的防治提供理论依据。方法:选择健康雄性清洁级SD大鼠36只,体重约200±20g,(购自河北医科大学动物中心),随机分为正常对照(NC组,n=12)、糖尿病模型组(DM组,n=12)、糖尿病瑞格列奈干预组(RT组,n=12)。适应性喂养1周后,空腹12小时,糖尿病模型组大鼠一次性腹腔注射STZ(65mg/kg),72h后尾静脉取血检测血糖≥16.7mmol/L,尿糖+++~++++,视为造模成功。NC组一次性腹腔注射等剂量柠檬酸缓冲液。试验期间所有大鼠均自由进食水,动物房温度(20℃~26℃)、湿度(40%~70%)相对恒定。RT组大鼠给予瑞格列奈(RE)2mg/kg,1/日,植物油溶剂灌胃,NC组、DM组每天予等量植物油灌胃。分别于造模成功后8周、12周末,每组任取6只大鼠,测定24h尿蛋白(24 h UP)、血糖、尿素氮、血肌酐。并收集大鼠肾组织标本,制备组织切片,行苏木素-伊红染色(HE染色)及糖原染色(PAS),光学显微镜下观察大鼠肾脏病理变化;检测肾组织MDA含量、T-AOC活性,免疫组织化学及real-time PCR方法检测TGF-β、NF-κB的表达。实验所得数据用均数±标准差(x±S)表示,应用SPSS 16.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析,不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验,P<0.05有统计学意义。结果:1一般情况DM组、RT组大鼠腹腔注射STZ后逐渐出现多饮、多食、多尿,反应迟缓,毛发失去光泽,体重逐渐下降,其中DM组症状较RT组明显加重,而NC组大鼠饮食正常,反应灵敏,生长发育良好,体重明显增长。2生化指标2.124小时尿蛋白定量与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组大鼠24小时尿蛋白水平均升高(P<0.05);与同期DM组相比,RT组大鼠24小时尿蛋白水平降低(P<0.05)。2.2血糖与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组大鼠血糖水平均明显升高(P<0.05);与同期DM组相比,RT组血糖变化不明显(P>0.05)。2.3血肌酐、尿素氮与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组大鼠血肌酐、尿素水平升高(P<0.01);与同期DM组相比,RT组血肌酐、尿素氮水平下降(P<0.05)。3氧化应激指标3.1MDA测定与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组大鼠肾组织MDA水平显著升高(P<0.05);与同期DM组相比,RT组MDA水平均有不同程度的下降(P<0.05)。3.2 T-AOC测定与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组大鼠肾组织内的T-AOC活性显著降低(P<0.05);与同期DM组相比,RT组T-AOC活性升高(P<0.05)。4肾脏组织变化光镜显示,NC组大鼠肾脏组织结构清晰,肾小管上皮细胞排列整齐,基底膜染色均匀一致,无系膜细胞及系膜基质增多等异常改变。与NC组相比,DM组肾小球体积增大,肾小球系膜基质弥漫增多,系膜细胞增多,基底膜增厚,12周末时病理改变更明显。RT组肾脏组织结构较DM组得到改善。5免疫组织化学检测与同期NC组相比,8周末、12周末,DM组、RT组NF-κB、TGF-β表达均增多(P<0.05);与同期DM组相比,RT组NF-κB、TGF-β表达水平不同程度下降(P<0.05)。6 Real-time FQ-PCR检测与同期NC组相比,8周末、12周末时,DM组、RT组NF-κB m RNA、TGF-βm RNA表达均增多(P<0.05);与同期DM组相比,RT组NF-κB m RNA、TGF-βm RNA表达水平不同程度下降(P<0.05)。结论:1 DM大鼠肾脏组织MDA表达增高,T-AOC活性降低,提示处于氧化应激状态,同时NF-κB、TGF-β表达升高,表明有炎症反应及纤维化机制参与。2瑞格列奈可减少DM大鼠蛋白尿的产生、改善肾脏功能;可降低肾脏组织MDA含量,提高T-AOC活性并减少NF-κB、TGF-β表达,从而减轻氧化应激、炎症反应,延缓肾脏纤维化,起到肾脏保护作用。