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目的本实验培养原代小鼠气道上皮细胞,观察鸡卵白蛋白(OVA)刺激小鼠气道上皮细胞24h、48h前后,YKL-40及气道-骨髓信号分子Eotaxin、GM-CSF、IL-5在气道上皮细胞中的蛋白及基因表达水平,且通过观察OVA刺激气道上皮细胞前后上述细胞因子表达水平变化的相关关系,初步探讨气道上皮细胞中YKL-40的表达情况及其可能在支气管哮喘的发生发展中的作用及机制。方法分离并培养来源于C57BL/6小鼠的气道上皮细胞,对第3代细胞经形态学及细胞角蛋白免疫荧光染色法进行鉴定;以OVA刺激气道上皮细胞,提取OVA刺激前及刺激后24h、48h的细胞上清液,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中YKL-40、Eotaxin、 GM-CSF及IL-5的蛋白含量；用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测气道上皮细胞中YKL-40的蛋白表达水平；应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定性检测OVA刺激前及刺激24h、48h后气道上皮细胞中YKL-40、Eotaxin、GM-CSF及IL-5的基因表达水平；实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)检测YKK-40在气道上皮细胞的基因表达水平。所得结果用SPSS18.0软件进行统计分析,以P<0.05为有统计学差异。结果原代培养的气道上皮细胞,进入对数生长期可形成典型的“细胞岛”,对上皮细胞特异的细胞角蛋白进行免疫荧光染色,胞浆内可见绿色荧光；用含有200μg/ml OVA培养基培养原代小鼠气道上皮细胞,相比单独用培养基的对照组,24h,48h OVA组YKL-40(24h OVA组：54.967±6.79,48h OVA组：66.843±9.36)、Eotaxin (24h OVA组：60.59808±8.19,48h OVA组：71.342±9.63)、GM-CSF (24h OVA组：172.2453±10.19,48h OVA组：197.7028±13.63)及IL-5(24h OVA组：13.18277±3.35,48h OVA组：15.02008±5.34)的蛋白与mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),48h OVA组较24h OVA组的mRNA及蛋白表达水平也有增高(P<0.05),48h对照组较24h对照组YKL-40(24h Control组：26.057±3.79,48h Control组：27.73±5.14)、Eotaxin (24h Control组：41.93995±4.74,48h Control组：46.475±5.89)、GM-CSF (24h Control组：121.7628±9.35,48h Control组：136.8115±8.14)及IL-5(24h Control组：8.37116±3.63,48h Control组：9.38617±4.14)的mRNA与蛋白表达水平则没有明显统计学差异(P>0.05)；相关性分析表明,YKL-40升高的水平与气道骨髓信号分子Eotaxin (r=0.9023, P<0.01)、GM-CSF (r=0.8077, P<0.01). IL-5(r=0.882, P<0.01)水平呈正相关。结论①原代培养小鼠气道上皮细胞24h、48h后上皮细胞及培养上清液中均可检测到YKL-40,证实气道上皮细胞可以分泌YKL-40;②OVA刺激后,气道上皮细胞YKL-40水平表达明显上调,提示哮喘状态下气道上皮细胞可以通过上调YKL-40表达参与支气管哮喘发病过程；③OVA刺激后,气道上皮细胞YKL-40mRNA及蛋白表达水平明显上调,且表达水平的变化与气道-骨髓信号分子Eotaxin、GM-CSF、IL-5呈正相关,提示抗原激发后YKL-40表达上调可能经由调控气道—骨髓信号分子Eotaxin、 GM-CSF、IL-5表达参与气道嗜酸性粒细胞炎症的形成。