猪繁殖与呼吸综合征自身抗独特型抗体及其免疫调节作用研究

来源 :中国人民解放军军需大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:talisa
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通过将抗PRRSV囊膜糖蛋白(GP5)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体Mab-25c、Mab-19Bd、Mab-15A1和正常鼠IgG的F(ab’)2片段分别包被酶标板,应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测443份(59头猪)感染PRRSV阳性血清和对照猪样品470份(60头猪)阴性血清中的Aab2。所有PRRS阴性对照猪450份血清样品与正常鼠IgG F(ab’)2片段以及包被Mab-15A、Mab-25C和Mab-19Bd的F(ab’)2片段进行反应的OD450nm值均低于0.4,这样,将OD450nm的0.4值定为该方法的取值,根据这一取值,所有PRRSV感染猪血清的443份样品均无Aab-2s抗Mab-15A,其OD450nm均低于0.4,其正常鼠IgG F(ab’)2片段也不与PRRSV感染猪血清的539份样品反应,其OD450nm值均低于0.4。316份PRRS样品为Aab2抗Mab-25c阴性,因其OD450nm值小于0.4。127份PRRS样品为Aab2抗Mab-25c阳性,因其OD450nm大于0.4。114份PRRSV样品视为Aab-2s抗Mab-19Bd阳性、329份样品视为抗Mab-19Bd阴性。从以上抗Mab-25c和抗Mab-19Bd的阳性猪血清中发现,其中有8头猪的Aab2(抗Mab-25c和Mab-19Bd)仅出现在21-49DPI,并在35DPI处效价最高,而另外的39头猪Aab2(抗Mab-25C和Mab-19Bd)仅出现在63-98DPI,并在77DPI处效价最高。用相同的血清进行病毒分离和PCR试验发现,有8头猪在感染PRRSV后第49天至屠宰时,其血清中不存在PRRSV病毒,该8头猪的Aab2仅在21-49DPI出现并在35DPI处效价最高;而另外51头猪直至屠宰时,其血清中可检测出PRRSV病毒,即存在持续感染状态。这说明,通过Aab2的检测,可以推断PRRSV感染猪是否成为持续感染。 应用Mab-15A,Mab-19Bd或Mab-25C免疫鼠,产生不同种类的抗体Ab-2s,通过间接ELISA试验与来源于猪的抗PRRSV病毒抗体Ab-1s反应。免疫不同的Mab-1s产生的Ab-2s的鼠血清不仅能识别Mab-1s,而且能识别其它猪Ab-1s,因为这些来源于猪血清的Ab-1s分别能抑制来源于鼠的Ab-2s与Mab-15A1、Mab-19Bd、Mab-25c反应。同样,该鼠的Ab-2s也能与来源于PRRSV感染猪的Aab2对Mab-1产生竞争抑制作用。这一结果表明,这些Aab2识别的独特位点为抗PRRSV Ab1的共同位点。 对分离纯化的AabZ进行进一步鉴定从四头代表猪的不同时期血清是否具有相同或相似特异性。通过将不同的 AabZ(0.2 u a/IL)包被于固相酶标板,应用竞争ELISA试验将单个不同的AabZ与Mab-25进行竞争抑制反应。结果表明:①AabZ(Zug/孔)可完全竞争(98-99%)自身与 Mab25反应。②来自于非持续感染的猪血清中的AabZ之间也可完全竞争抑制。③来自于持续性感染的猪血清中的AabZ也可完全竞争抑制(9598%)。④来自不同组猪血清中的AabZ(持续性感染与非持续感染之间)仅出现非完全抑制(50-60%)。同样的浓度2 u g/孔)。⑤其竞争抑制率依赖于竞争剂的浓度。③除去了AabZ的血清样品也与Mab25竞争抑制单个不同的AabZ,除去了AabZ的血清样品在1:10稀释度的条件下可与来自同一血清的AabZ和自其它3头猪的AabZ竞争抑制55-60%。①正常猪血清和IgG以及仅合抗N蛋白抗体的血清不与Mab25反应,也不与包被的AabZ产生竞争抑制反应。这些结果表明这两种AabZ的特性和功能可能不同。 体内注射抗N蛋白的汕 不影响PRRSV病毒感染,注射抗回蛋白和W 蛋白抗体可起着一定的被动免疫作用,注射针对硼蛋白和W 蛋白的自身抗独特型抗体,可影响PRRSV病毒的感染作用, 将W 蛋白的AabZ免疫5头猪,第7天感染PRRSV,其血清中自3DPI至7DPI均分离出PRRSV,但其中3头猪从14DPI直至屠宰时,均未分离出PRRSV,1头猪在14DPI至35DPI能分离出PRRSV,从42DPI至56DPI转为阴性。将饲蛋白的AabZ免疫另外5头猪,第7天感染PRRSV,其血清中自3DPI至7DPI也均分离出PRRSV。但其中2头猪从14DPI直至屠宰时,均未分离出PRRSV,2头猪在14DPI至35DPI能分离出PRRSV,从42DPI至56DP!转为阴性。免疫作用非常显著,该AabZ为具有内影像作用,可作为W 或饲蛋白的替代抗原从而产生具有中和效应的抗体,能起着机体免受PRRSV感染的作用。
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