刺梨多酚提取物的抗氧化评价及机制研究

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日常生活中,机体不可避免地会暴露于不利的外界环境中,如紫外线照射、烟尘、雾霾颗粒、不良的生活方式及个人行为等,均可能导致氧化还原状态失衡。为了再次平衡氧化还原系统,补充抗氧化剂是最为有效的方式之一。天然抗氧化剂来源广泛,毒副作用小且抗氧化能力强,刺梨果实抗氧化物质含量极其丰富,可以深入研究其抗氧化特性。本论文以刺梨为主要原料,针对刺梨多酚类物质进行提取、纯化、分离,探究其多酚含量、组分结构、抗氧化活性及其作用机制,主要研究结果如下:(1)刺梨多酚提取物的纯化工艺研究以刺梨多酚提取物(Rose roxburghii tratt.polyphenols extract,RRTP-E)为原料,通过考察树脂型号、吸附时间、解吸液浓度、上样量体积及p H、洗脱液用量等多个因素探究刺梨多酚的纯化工艺。结果表明,相较于其他型号大孔树脂,AB-8型更适于刺梨多酚的吸附,其吸附过程符合Freundlich热力学模型(R~2>0.9900)及Langmuir模型(R~2>0.9500),当实验温度为298 K时更利于大孔树脂对刺梨多酚的吸附;纯化参数为:吸附时间600 min、解吸溶剂80%乙醇溶液、上样量10 m L、洗脱液用量50 m L。在该工艺参数下,刺梨多酚的平均含量从30.45%增加至56.92%。对比分析了刺梨多酚在纯化前后的抗氧化活性。发现经AB-8型大孔树脂纯化后,刺梨多酚的抗氧化能力显著提高,表明该工艺可行且稳定,可作为刺梨多酚的纯化工艺条件。(2)刺梨多酚各组分结构表征及体外抗氧化活性研究利用溶剂萃取法进一步精制刺梨多酚纯化物(Rose roxburghii tratt.polyphenols purification,RRTP-P),得到上相Fr1和下相Fr2,经FT-IR和UV检测,Fr1及Fr2都含有多酚物质的相关特征官能团。通过体外抗氧化活性发现,Fr1的体外抗氧化能力强于Fr2。利用HSCCC分离Fr1得到4个组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ,4个组分都含有多种多酚化合物的特征官能团,经HPLC和FT-IR检测,推断4个组分中可能包括绿原酸、槲皮苷及鞣花酸。同时,通过测定总抗氧化能力、清除ABTS+·及·OH等指标发现,体外抗氧化活性从强到弱依次为:Ⅰ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅳ。(3)刺梨多酚的体内抗氧化机制研究建立D-gal致衰老小鼠模型,研究组分Ⅰ、Fr1及Fr2等3个物质对D-gal致衰老模型小鼠抗氧化应激的作用,探讨其可能的作用机制。将实验小鼠按照体质量随机分为对照组、模型组(MC)及各治疗组,同时建模并治疗45天。观察各组小鼠的一般行为特征,MC组小鼠饮食量下降,毛发更为稀疏,行动变得迟缓;测定脑组织和血清中ACH-E、MDA、CAT、GSH-PX、SOD等指标,结果表明MC组小鼠MDA含量显著增高(P<0.05),ACH-E含量显著降低(P<0.05),CAT、GSH-PX及SOD活力水平显著下降(P<0.05),证明建模成功。与MC组小鼠相比,其余各组小鼠的衰老症状均得到了不同程度的缓解。由此说明,刺梨多酚各组分对D-gal导致的衰老症状有一定的干预效果。采用蛋白免疫印迹法检测脑中Nrf2、GPX1、GCLC、SOD3、GSTP1及ACAT1等蛋白的表达水平。结果表明:与自然对照组(NC)相比,MC组脑组织中Nrf2、GCLC、SOD3及GSTP1等蛋白的表达量下降,表明D-gal的持续摄入会抑制Nrf2信号通路,而刺梨多酚的介入能明显上调Nrf2、GPX1、GCLC、SOD3、GSTP1和ACAT1等蛋白的表达,说明刺梨多酚化合物可能是通过对Nrf2信号通路的调控来提高机体抗氧化应激的能力。
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