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目的:1.应用6-姜酚能上调活性氧簇的特点,研究6-姜酚对T细胞增殖与分化的影响。2.进一步将6-姜酚应用于T细胞介导的多发性硬化症理想模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的防治影响实验,验证其疗效。方法:1.处死C57BL/6小鼠后分离其脾脏与淋巴结,用毛玻璃片研磨制成组织匀浆。使用离心机分离去除结缔组织后,再使用红细胞裂解液裂解并再次分离去除红细胞,得到脾细胞悬液。使用T细胞分选试剂盒分选后可得到T细胞悬液在细胞培养板进行培养与实验,而使用CD4+T细胞分选后可得CD4+T细胞。T细胞悬液用于初步测试6-姜酚对于T细胞的增殖影响,使用流式细胞术检测细胞增殖的峰值状态。CD4+T细胞添加不同细胞因子处理并优化出最佳添加方案,于48孔细胞培养板培养可分别获得调节性T细胞等。将6-姜酚应用于上述细胞因子处理培养过程,使用流式细胞术检测细胞增殖峰值与细胞分化数量,了解并分析其对T细胞的增殖与分化过程的影响。2.髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55多肽、百日咳毒素与结核分枝杆菌联合使用构建小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,将C57BL/6小鼠麻醉后进行注射。百日咳毒素于构建时与构建48小时后分别进行腹腔注射,髓鞘少突胶质细胞糖蛋白与结核分枝杆菌使用不完全弗氏佐剂混合,并于构建时在背部约前肢肩胛骨及后肢髋关节部位进行皮下注射。成功构建小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型后,测试6-姜酚对于实验性自身免疫性脑脊髓炎病程进行进展的影响并优化出最佳剂量防治方案。结果:1.CFSE染色剂能够反映出细胞增殖情况,但同时其具有一定的细胞毒性。经过数次调整与优化添加浓度,发现CFSE在0.5μM左右具有较好的染色效果,同时具有较小毒性而不会导致过量细胞死亡。将6-姜酚应用于T细胞增殖培养实验中以确定其对细胞增殖影响,实验结果表明6-姜酚对T细胞具有剂量依赖性抑制作用。2.在前期实验基础上优化细胞因子添加条件与细胞培养条件,确立出调节性T细胞最佳分化条件,为细胞实验奠定基础。将6-姜酚应用于调节性T细胞分化影响实验后,发现低剂量的6-姜酚对调节性T细胞分化具有一定的抑制效果,但通过提高剂量可以消除影响。3.通过对国内外小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型方法进行分析后,挑选C57BL/6小鼠作为目标并优化构建条件,最终成功构建出发病率100%的实验动物模型,为动物实验奠定基础。将6-姜酚应用于EAE动物模型病程影响实验后,发现6-姜酚显著抑制了实验性自身免疫性脑脊髓炎模型发病进程。结论:1.6-姜酚对T细胞增殖具有剂量依赖性抑制作用,因此对于T细胞过量增殖引起的实验性自身免疫性脑脊髓炎存在潜在治疗效果。调节性T细胞对机体免疫平衡起重要作用,对其他T细胞的过量增殖具有抑制调节作用,而低浓度6-姜酚对调节性T细胞的分化与增殖具有一定抑制作用。但通过调节优化剂量后,可以消除其抑制效果。2.随着小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型病程进展,小鼠会相继发展至四肢瘫痪以及死亡的症状。应用6-姜酚于小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型构建过程,并优化剂量与给药方案后,能显著抑制其发病进程。