BRMSl (Breast cancer metastasis suppressor1)是在乳腺癌中克隆的肿瘤转移抑制基因,在转移性的乳腺癌和黑色素瘤中BRMSl能够显著抑制癌细胞的淋巴结转移和肺转移能力。BRMS1在正常人组织中广谱表达,但在转移性的乳腺癌和黑色素瘤中BRMS1表达水平显著下调,而且BRMS1的表达水平和乳腺癌患者的预后密切相关。BRMS1在肝癌中的表达特征及其在肝癌发生和发展中的作用还鲜见报道。我室的前期工作发现BRMS1在原发性肝癌细胞系中的表达水平高于高转移性肝癌细胞系中的水平,在本论文中,我们继续用实时定量PCR和Western blotting的方法检测了BRMS1在肝癌组织(癌和癌旁组织)和肝癌细胞株中的表达水平,发现BRMS1在癌组织中显著下调表达,进一步提示了BRMS1与肝癌发生发展的内在联系。为了深入探讨BRMS1在肝癌中的生物学功能,我们在转移性肝癌细胞系SK-Hep1中构建了稳定表达BRMS1的细胞株,并检测了BRMS1表达对SK-Hep1细胞的影响。结果显示：BRMS1不影响SK-Hep1细胞的细胞周期和在正常培养条件下的生长速率,但是稳定表达BRMS1的细胞在血清饥饿条件下的生长速率明显变慢,在悬浮培养条件下的凋亡水平显著增加。同时,体内实验初步证明外源表达BRMS1可以抑制SK-Hep1在裸鼠体内的肺转移和淋巴结转移能力,而对原发瘤生长没有影响。这些结果提示BRMS1很可能通过调节肝癌细胞凋亡来抑制肝癌转移。利用慢病毒介导的RNA干扰技术在高表达BRMS1的非转移性肝癌细胞系Hep3B和Huh7中构建消减内源BRMS1的细胞株的实验进一步发现：和对照细胞相比,消减了内源BRMS1的细胞株在血清饥饿条件下的生长速率较快,在悬浮培养时脱巢凋亡的水平较低。这一结果进一步证明了BRMS1调节细胞凋亡和肿瘤转移的潜在作用。在研究BRMS1调控肝癌细胞凋亡、抑制肝癌转移的分子机制时,我们发现BRMS1可以调控骨桥蛋白(osteopontin, OPN)的表达。OPN是肝癌转移的关键调节蛋白之一。我们发现过量表达BRMS1可以抑制OPN的mRNA和蛋白表达水平,反之,干扰BRMS1可以显著提高OPN的表达。进一步检测BRMS1和OPN的双干扰细胞株抵御脱巢凋亡的能力,发现抑制OPN的表达可以逆转消减BRMS1对脱巢凋亡的影响,这一结果强烈提示我们BRMS1对OPN的调控作用很可能是其发挥肝癌转移抑制活性的关键机制所在。综上,本论文对BRMS1在肝癌发生发展中的表达变化、细胞学功能和分子机制进行了研究,首次发现了BRMS1在肝癌中的表达抑制现象和转移抑制作用,并揭示了BRMS1可以通过调节OPN的表达从而调控细胞凋亡,抑制肿瘤细胞转移的作用机制。这一发现不仅有助于我们更好地认识肝癌转移的分子机制,更为肝癌的临床辅助诊断和防御治疗提供了重要的理论支持。丁酸钠是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,它可以诱导多种肿瘤细胞的生长抑制,细胞分化和凋亡。然而,丁酸钠在肝癌中的生物学功能以及作用机制,尚鲜有报道。在论文的这一部分中我们检测了丁酸钠对两种肝癌细胞生长的影响,发现不同浓度的丁酸钠对肝癌细胞生长具有不同的效应。在较低浓度(0.25mM)的丁酸钠作用下,SK-Hep1和SMMC-7721表现出S期细胞比例显著增多,生长速率提高,p21Cip1的mRNA和蛋白表达水平均有显著降低；但是,用较高浓度(5.0mM)的丁酸钠处理细胞,两种细胞均出现G1期滞留,p21Cipl和p27Kip1蛋白表达水平显著提高。同时,在5.0mM丁酸钠的处理下,p45表达明显下降,意味着丁酸钠介导的p21Cip1和p27Kip1表达上调与泛素化蛋白质降解途径有关。进一步的研究表明,高浓度的丁酸钠还会引起细胞凋亡和PARP剪切。我们的结果显示：高浓度的丁酸钠通过提高p21Cip1和p27Kip1表达水平抑制细胞生长,而低浓度的丁酸钠通过降低p21Cip1表达水平发挥截然相反的作用。这一发现可以帮助我们在选用丁酸钠作为肿瘤治疗药物时,制定出更加有效更加安全的方案。