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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物产生急性高热等症状。该病感染能力强,传播途径多,在多个国家和地区发生过大流行,严重阻碍了畜牧业发展。口蹄疫病毒有7个血清型,分别为O、A、C、Asia 1、SAT 1-3型,每个血清型又包含多个亚型,各型之间不存在交叉反应。我国的主要流行血清型为A型、O型和Asia 1型。2009至2013年间,在我国上海、湖北、武汉、新疆阿克苏地区以及周边国家多次爆发A型口蹄疫疫情,给当地经济带来了巨大的损失。为建立一种有效检测A型FMD的方法,首先需获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白。经过PCR扩增得到A型FMDVvp1基因片段,与原核表达载体pET-28a连接,构建重组质粒pET-A-vp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE及Western-Blot分析表明,A-VP1重组蛋白分子质量约为29 ku,能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别,蛋白表达正确。超声破碎后发现A-VP1蛋白以包涵体形式存在。通过对表达条件进行优化,发现在37℃条件下,OD600为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达6 h后,A-VP1蛋白的表达量最大。ELISA检测结果显示A-VP1包涵体蛋白经过洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后活性较高。A型FMDVVP1活性蛋白的成功表达为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测试剂盒。对前期制备的A-VP1蛋白进行Westem-Blot检测,结果表明,A-VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体检测的方法。以最佳质量浓度1 mg/LA-VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为1:100,最佳的酶标二抗稀释度为1:2 000,建立A型FMDV抗体ELISA检测方法。该方法的敏感性为94.32%,特异性为99.09%,批内与批间重复试验变异系数均小于10%。采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54%。以此为基础组装A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒,该试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平。