人羊膜间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响及致瘤性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:along0429
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本试验研究人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体内、外条件下对淋巴细胞增殖的影响,并将hAMSCs接种到免疫缺陷小鼠皮下后,观察hAMSCs致瘤情况,了解hAMSCs低免疫原性的可能机制,为干细胞临床治疗提供实验依据。试验通过双酶消化法即两次胰蛋白酶和一次Ⅰ型胶原酶共同消化分离hAMSCs,运用流式细胞术和免疫荧光的方法进行细胞学鉴定,确定获得的细胞为hAMSCs,采用CCK-8的方法测定淋巴细胞活细胞数目,ELISA测定细胞上清液中干扰素-γ(IFN-γ)的表达,研究体外条件下hAMSCs对刀豆素蛋白(ConA)引起异体淋巴细胞增殖和淋巴细胞分泌IFN-γ剂量的影响;将CCl4橄榄油混合液按体重比腹腔注射到小鼠体内造小鼠肝损伤模型后,小鼠尾静脉注射hAMSCs治疗肝损伤,测定小鼠3d、7d、14d、21d、30d外周血中淋巴细胞量和血浆中IFN-γ水平变化;分别将5×106hAMSCs、5×106和1×107肝癌细胞(HepG2)皮下注射于免疫缺陷小鼠背部,观察致瘤形成情况,50天后将肿瘤取出,HE染色进行组织学观察。研究结果显示,运用酶消化法分离培养hAMSCs,经鉴定、检测后,获得了纯度较高的hAMSCs。CCK-8法测定,5μg/mLConA能够引起淋巴细胞发生增殖,与hAMSCs共培养72h后,淋巴细胞活细胞数目较ConA刺激增殖组活细胞数目显著降低(P<0.01),hAMSCs抑制效果明显。ELISA测定1×105个hAMSCs对淋巴细胞抑制72h的培养液中IFN-γ分泌情况,共培养组培养液中IFN-γ分泌量显著低于对照组(P<0.01)。尾静脉注射hAMSCs肝损伤小鼠治疗后,与损伤组相比,治疗组小鼠淋巴细胞数量有降低趋势;治疗组小鼠体内血浆中IFN-γ含量随着hAMSCs注入时间的延长也显著降低(P<0.01)。50d内hAMSCs组未见肿瘤形成,HepG2注射组均有瘤形成。测定注射hAMSCs组AFP、CEA指标,均为正常。
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