论文部分内容阅读
目的：乳腺癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。上皮间质转变(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指上皮细胞向间充质细胞转化的现象,EMT与肿瘤侵袭转移、耐药和肿瘤干细胞密切相关。表皮生长因子(Epidermal Growth Factor, EGF)是诱发EMT的重要细胞因子之一。CTEN(COOH-terminus tensin-like molecule)是tensin基因家族中的一员,该家族参与细胞粘附、迁移及信号转导等。CTEN在多种恶性肿瘤中表达增高,并与肿瘤侵袭、转移及患者预后相关。有报道指出,CTEN参与结肠癌细胞EMT。目前关于CTEN的研究报道不多,缺乏CTEN在乳腺癌的深入研究。CTEN在乳腺癌的发生、发展过程中发挥怎样的作用?在本研究中,将检测CTEN在乳腺癌组织及细胞系中的表达情况,重点探讨CTEN在外源性EGF诱导的乳腺癌细胞EMT中的调控作用,分析其调控机制。通过本研究,加深对CTEN的认识,揭示新的乳腺癌侵袭及EMT相关的分子基础和作用机制。方法：1.免疫组织化学法检测侵润性导管癌组织中CTEN和p-ERK1/2蛋白的表达,分析蛋白表达情况与乳腺癌临床病理特征间的关系及两种蛋白之间的关联。2.外源性EGF刺激乳腺癌MCF-7细胞,观察细胞形态变化,Western blot法检测CTEN、E-cadherin、vimentin蛋白的变化。设计特异性CTEN-siRNA,采用脂质体法转染MCF-7乳腺癌细胞,采用实时荧光定量PCR法检测CTEN mRNA的表达,筛选并鉴定干扰效率最高的siRNA进入后续实验。3.外源性EGF刺激乳腺癌MCF-7细胞后,siRNA转染沉默CTEN表达及使用抑制剂U0126阻断ERK信号通路,观察细胞形态变化,Western blot法检测CTEN、 E-cadherin、vimentin、ERK1/2、p-ERK1/2、Raf-1及Snail蛋白的表达情况；Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭性。结果：1.在乳腺癌组织标本中,CTEN蛋白表达的阳性率是88.1%,其表达水平与乳腺癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期、肿瘤大小、PR、N-cadherin表达有关(P＜0.05)。p-ERK1/2蛋白表达的阳性率是83.3%,其表达水平与乳腺癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期、N-cadherin表达有关(P＜0.05)。CTEN蛋白表达强度与p-ERK1/2蛋白表达强度之间呈正相关(r=0.526,P<0.01)。2.外源性EGF刺激乳腺癌MCF-7细胞后,观察细胞形态由上皮样向间质样改变,Western blot法检测CTEN蛋白表达上调,同时E-cadherin蛋白表达下降、vimentin蛋白表达增高。CTEN-siRNA可有效抑制CTEN mRNA表达(抑制率>90%)。3.外源性EGF刺激乳腺癌MCF-7细胞后,CTEN-siRNA转染,发现细胞形态由间质样向上皮样转变；且CTEN蛋白、vimentin蛋白、p-ERK1/2蛋白、ERK1/2蛋白、Raf-1蛋白及Snail蛋白表达减少,E-cadherin蛋白增加；使用ERK通路特异性抑制剂U0126后,p-ERK1/2蛋白及Snail蛋白均减少,Raf-1蛋白的表达无变化；转染CTEN-siRNA可抑制EGF诱导的MCF-7细胞的侵袭细胞数增加(P<0.05)。结论：1.癌基因CTEN的表达与乳腺癌生物学行为密切相关,且CTEN蛋白的表达与p-ERK1/2蛋白表达呈正相关。2.EGF可促进乳腺癌MCF-7细胞发生EMT,同时上调CTEN蛋白。3.沉默CTEN可部分逆转EGF诱导的EMT,其机制是沉默CTEN可下调Raf-1从而阻滞Ras/Raf/MEK/ERK/Snail信号通路。4.沉默CTEN表达可部分逆转EGF诱导的MCF-7细胞侵袭力增强。