论文部分内容阅读
研究背景急性白血病(Acute Leukemia, AL)是严重危害人类健康的血液系统恶性疾病。DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases, DNMTs)能够控制基因甲基化的DNMT3A基因编码的酶是其中调节从头甲基化的两种酶之一。DNMTs可通过控制基因的甲基化状态而达到调节该基因表达水平的目的。有研究表明,部分急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者存在DNMT3A基因的突变和缺失,其中M4和M5型的AML患者突变频率最高。另有研究报道,DNMT3A突变在AML中可作为独立的危险因素,能提示患者预后不良,包括较短的总生存期(Overall survival, OS)和较低的完全缓解(complete remission, CR)率。到目前为止,AML患者中DNMT3A表达水平、DNMT3A突变与预后三者之间的关系还不完全清楚。此外,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)中DNMT3A的突变及表达情况罕见报道。因此,AL患者中DNMT3A的表达、DNMT3A突变与预后之间的关系有待进一步研究。目的检测AL患者骨髓单个核细胞DNMT3A基因R882位点的突变情况及DNMT3A表达情况。探讨AL患者DNMT3A基因突变情况、DNMT3A表达水平与预后三者之间的关系,进一步明确DNMT3A基因在AL患者疾病发生发展中的机制,为AL患者进行危险度分级提供新的指标。方法1.研究对象的选择:选取山东大学齐鲁医院2011年7月~2012年7月期间住院诊疗的99例初诊AL患者,其中男52例,女47例,中位年龄41(12~83)岁。99例初诊AL患者包括:57例初诊AML患者,41例初诊ALL患者和1例初诊急性双表型白血病(biphenotypic acute leukemia, BAL)患者;收集患者临床诊疗及实验室检查资料;以16例正常人作为正常对照,其中男6例,女10例,中位年龄46(34~65)岁。2.收集研究对象骨髓单个核细胞,提取基因组DNA和RNA。用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法扩增DNA中DNMT3A基因第23号外显子含R882位点的部分片段,然后送山东省农科院测序中心对该片段进行测序。将提取的RNA逆转录成cDNA后,应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)方法检测DNMT3A基因的表达,同时以β-actin作为内参照。3.以SPSS17.0统计软件比较不同组间的DNMT3A表达水平和诱导化疗后的CR率结果1.57例AML患者中,发现10例患者具有DNMT3A突变。突变类型分别为6例R882H,2例R882C,1例R882P和1例M880V,突变率为17.5%,其中M880V为新发现的突变类型。41例ALL患者和1例BAL患者未发现R882位点或其他位点突变。2.AML患者的DNMT3A表达水平比较:AML患者DNMT3A的表达水平显著高于ALL患者或正常人。DNMT3A突变的AML患者低于野生型AML患者,而与『正常人组无显著性差异。野生型AML患者显著高于正常人。同时AML患者中根据FAB分型的各亚型患者之间DNMT3A表达水平有显著性差异,M5型AML患者组DNMT3A表达显著低于其他亚型AML患者组(包括M2.M3和M4亚型)。3.ALL患者与正常人组没有统计学差异,T-ALL患者组与B-ALL患者组的DNMT3A表达没有明显差异。4DNMT3A突变的AML患者组CR率显著低于野生型AML患者组。AML患者中DNMT3A低表达组CR率显著低于DNMT3A高表达AML患者组,而ALL患者中DNMT3A低表达组与高表达组CR率没有显著性差异。结论1.部分初诊AML患者存在DNMT3A基因突变,并且DNMT3A突变患者比野生型AML患者的CR率低。ALL患者中未发现DNMT3A基因突变。2.在AML中,DNMT3A突变患者DNMT3A表达低于野生型患者。3.在AML中,DNMT3A低表达组CR率低于高表达组;ALL中,DNMT3A低表达组和高表达组无显著性差异。