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二十一世纪以来,我国逐渐发展成为一个新型经济、工业与农业化国家,而人口的逐渐老年化、环境的逐渐恶化以及耕地面积的逐渐缩小使得如何提高作物的产量研究至关重要。氮素作为作物生长发育的重要大量营养元素之一与水稻产量密切相关,因此,开展水稻氮素吸收与利用相关基因的挖掘与研究对保证水稻的稳产与高产十分必要。水稻作为我国的主要粮食作物之一,那么氮素在水稻育种方面的研究重要性可想而知。大量研究表明,水稻中氮吸收与利用相关基因众多,其中NRT(Nitrate-protein symporter)和NLP(Nin-like family protein)两个基因家族参与水稻氮吸收与利用的研究近年来也越来越多。另外,CRISPR/Cas9技术作为新的基因编辑技术,因成本低,效率高,易操作等优点使其在基因功能研究中被广泛使用。本论文利用CRISPR/Cas9技术构建水稻NRT和NLP两个家族基因的敲除载体,以粳稻中花11(ZH11)为受体,通过农杆菌介导的遗传转化进行目标基因敲除,以获得靶标基因的敲除突变体。首先根据水稻数据库中的NRT家族及NLP家族基因序列信息按要求构建PYL-CRISPR/Cas9-ubi-NRT/NLP带有特异性靶序列且具有潮霉素抗性的CRISPR/Cas9双靶点表达载体。另外,以粳稻ZH11为材料,进行农杆菌介导的遗传转化,经带有潮霉素培养基筛选后再进行潮霉素阳性PCR鉴定,以期获得转基因阳性植株后进行后续鉴定分析。主要研究结果如下:(1)成功构建了带有特异性靶序列且具有潮霉素抗性的CRISPR/Cas9单基因双靶点表达载体共28个,其中NRT家族基因15个,NLP家族基因13个。(2)成功获得转基因植株T0代的基因有10个,它们是:1.7、0390、1442、3710、4764、NLP2、1236、1629、3771、2719。(3)经潮霉素阳性PCR鉴定以后,共获得324株T0代转基因植株,其中有249株为阳性植株,阳性比率达到76.85%。(4)经进一步敲除鉴定,其中NLP家族中0390基因的靶位点1位置附近有5株阳性植株在T0代发生了碱基替换、缺失、插入的突变情况。