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目的 AD是老年性痴呆最常见的形式。现对AD的诊断治疗的局限,很大程度上是由于动物模型的不完善。本实验选用Aβ注射的大鼠模型,脑海马内注射BK,观察BK在正常大鼠及AD大鼠中所引起的行为学及脑形态学的改变。以评价当应用Aβ、BK两种物质注入海马后,是否可建立一种更为可靠而持久的动物模型。 方法 实验动物Wister大鼠25只,雌雄各半。行水迷宫训练4天至大鼠学会迷宫,后随机分为5组,每组5只。分别为空白对照组,DW注射组,BK注射组,Aβ注射组,Aβ+BK注射组。参照文献定位双侧齿状回,各组大鼠齿状回注射一定剂量的相应药物。术后饲养2周后,测试水迷宫潜伏期并记录。测试后常规灌注取脑,放入4%PFA中后固定3天,酒精后固定,石蜡包埋。以注射点为中心连续切片厚7μm。行HE及Nissl染色,磷酸化Tau蛋白免疫组化染色。测量皮层及海马CA1、CA4区免疫阳性细胞积分光密度值。所有数据以SPSS11.5软件包处理分析。 结果 1.行为学检测 DW组与空白对照组之间潜伏期值无显著差异,P>0.05。 DW组与BK组、Aβ组、Aβ+BK组潜伏期之间差异显著,P<0.05。 AB+BK组与Aβ组、BK组潜伏期之间差异显著,P<0.05。 2.HE及Nissl染色 (1)空白对照组及DW组:海马各区及顶叶皮层细胞未见明显形态学改变,无明显小胶质细胞增生。 (2)BK组:海马各区及顶叶皮层细胞未见明显形态学改变,无明显小胶质细胞增生。与DW组相比未见明显不同。 (3)Ap组:海马齿状回背侧细胞带轻度受损,细胞数有所减少,细胞排列略紊乱。注射点周围的CAI、CA4区细胞排列略欠整齐,细胞数减少不明显。顶叶皮层神经元数目同前两组。HE染色未见明显小胶质细胞增生。 (4)Ap+BK组:海马齿状回背侧细胞带明显受损或完全消失,CAI、CA4区细胞明显排列紊乱,数目减少。顶叶皮层神经元数目也有所减少。HE染色显示,齿状回背侧细胞带缺失区明显小胶质细胞增生。 3.磷酸化Tau蛋白免疫组化结果。 Tau蛋白免疫组化阳性细胞表现为细胞浆及突起呈棕色,皮层及海马各区均可见Tau蛋白免疫阳性细胞。 海马CAI、CA4区免疫阳性细胞积分光密度值,Ap+BK组明显高于DW组、BK组、Ap组,均有显著差异,P<0.05;BK组与DW组及Ap组比较,也有显著差异,P<0.05;DW组与Ap组比较无显著差异,P>0.05。皮层区免疫阳性细胞积分光密度值,Ap+BK组明显高于其他三组,均有显著差异,P<0.05;DW组、BK组、A日组之间两两比较无显著差异,P>0·05。结论 1.证实了Ap注射人大鼠海马可引起大鼠行为学改变和神经元损害,但损害程度轻微,范围局限于药物注射部位及其周围。 2.BK注射人正常大鼠海马可引起大鼠行为学的改变,但神经元并未发生形态学的变化。 3.BK注人Ap所致AD大鼠海马,可引起比Ap单独注人更加明显的行为学改变,神经元损害不仅见于注射部位及其周围,而且见于远离注射区的顶叶皮层。 4.Ap与BK同时注人大鼠海马可产生协同作用,提示可以试用此方法建立AD动物模型,并对此进行进一步研究。