酶转化法制备开环异落叶松树脂酚

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开环异落叶松树脂酚(SECO)是亚麻木酚素的重要成分,是植物类雌激素的一种。有较强的抗氧化作用,在预防肿瘤、动脉粥样硬化和糖尿病等方面有很好的疗效。本文主要研究微生物酶法制备SECO。首先,从不同菌株中筛选出SDG-糖苷酶的高产菌株Asp. oryzae39,然后用SDG-糖苷酶转化开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)生成SECO。菌株的最佳生长温度为30℃。提取SDG-糖苷酶粗酶液,经DEAE-Cellulose DE52柱梯度洗脱纯化,再经PAGE对酶液进行再次分离纯化,SDS-PAGE得到SDG-糖苷酶单带,测定酶蛋白的分子量约为64.9kDa。SDG-糖苷酶在65℃以下较为稳定,最适反应温度为40℃;pH4.0-6.0之间酶较为稳定,最适pH为5.0。Na+、K+、Mg2+、Ca2+四种金属离子对SDG-糖苷酶的活力没有显著影响,Zn2+对酶活有弱促进作用,Cu2+对酶活有弱抑制作用,而Fe3+对酶活有强的抑制作用。SDG-糖苷酶的最大反应速度Vmax=0.66mmol/L·h,米氏常数Km=0.145mmol/L。底物浓度30mg/mL,反应8h,SDG转化率最高。采用萃取法分离纯化产物SECO,经过HPLC检测,产物SECO的纯度达到60%,得率为90%。
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