“方-证相关”是中医辨证论治和方剂学中的重要逻辑命题。方剂的功效不仅与方药配伍有关,而且还与其作用的对象有关,方剂功效与其所作用的证之间具有一定的适配性,即方剂效用优劣在相当程度上取决于所作用对象(病证)的病机与其方药配伍关系之间的针对性。方与证之间有关联程度大小的问题。虽然“方-证相关”目前正引起学术界高度重视,但是直到目前,还没有人能真正从实证意义上为其提供客观证据。 本课题采用肝郁大鼠(夹尾激怒法)为模型,选取四逆散类方(四逆散、逍遥散和柴胡疏肝散及自拟的柴芍草方),从神经-内分泌-免疫网络的角度,探查四方用于该证呈现出的不同药理作用谱,通过对作用谱的分析,发现其可能的同异规律,在类方层面上为认识中医方-证原理提供实证依据。 论文分为两部分,文献综述部分主要对四逆散类方临床与实验研究进行了总结,对肝郁证的研究进展进行了综述。实验研究部分在整体水平上对肝郁模型的现代生物学基础作一些探察,并在此基础上,对四逆散类方对该模型的不同影响进行了探讨。 研究一 肝郁大鼠内分泌功能状态探察 方法:将大鼠随机分为正常组、模型组 2 组,每组 10 只。用夹尾激怒的方法造模并后,观察不同时期的大鼠行为外观的变化,用放免法测定两组血浆 ACTH 水平。结果:经过夹尾激怒之后,大鼠的血浆 ACTH 水平出现明显升高,造模三周,可见到类肝郁表现。结果表明夹尾激怒肝郁大鼠模型存在皮质功能的亢进,该郁证模型复制可行。 研究二 四逆散类方对肝郁大鼠模型神经-内分泌-免疫网络的作用 方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、柴芍草组(CSC)、柴胡疏肝散组(CHSGS)、逍遥散组(XYS)、四逆散组(SNS)共 6 组,每组 10 只。用夹尾激怒的方法造模,造模成功后,中药各组大鼠按成人处方用量 0.5g/kg 的 10 倍量灌胃,每日 2 次,模型组组和空白对照组均灌服等容积的生理盐水,连续给药 7 天。在实验过程中半定量化观察各组大鼠的行为改变和情绪反应及一般情况,用高效液相、放免法分别测定肝郁大鼠海马的单胺类递质及其代谢产物含量、下丘脑 CRF、血浆 ACTH、血浆 VIP、SS 和血清 IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、CORT、GAS、MTL 水平。 结果:与正常组相比,模型组大鼠的血清 IL-1β含量、CORT 含量升高,下丘脑 CRF,血清 GAS、MTL 含量下降,均有显著性差异(P<0.01);海马 NE、5-HT、5-HIAA、DOPAC含量,血浆中 VIP、SS、ACTH 含量均见不同程度下降,血清 IL-2 和 IL-6 水平降低,血清TNF-α上升,但均无显著性差异(P>0.05)。 与模型组相比,CSC 组大鼠血清 IL-1β、CORT 含量下降,血清 MTL 含量上升,均有显著性差异(P<0.01);大鼠海马 NE、血浆 ACTH、血清 IL-2 升高,5-HT、5-HIAA、血清TNF-α降低,但均无显著性差异(P>0.05);海马 DOPAC, 下丘脑 CRF 含量,血浆 VIP、2 四逆散类方对肝郁大鼠模型神经-内分泌-免疫网络的作用SS,血清 IL-6、GAS 含量均无明显变化。与模型组相比,CHSGS 组大鼠的血清 IL-1β、CORT 含量下降,下丘脑 CRF 含量、血清 GAS 含量上升,有显著性差异(P<0.01);海马 NE、5-HT 和血浆 ACTH、VIP 含量上升 ,海马 DOPAC、血清 IL-2 和 TNF-α、血浆 SS 含量下降,但无显著性差异(P>0.05);海马5-HIAA、血清 MTL 、IL-6 含量均无明显变化。与模型组相比,XYS 组大鼠的血清 IL-1β含量下降和下丘脑 CRF 升高,有显著性差异(P<0.01),血清 GAS 含量上升,有显著性差异(P<0.05);海马 NE、5-HT,血清 IL-2、IL-6、MTL 含量,血浆 ACTH、VIP 含量均升高,海马 5-HIAA、DOPAC 和血浆 SS 含量降低,但均无显著性差异(P>0.05);血清 TNF-α和 CORT 含量无明显变化。 与模型组相比,SNS 组大鼠的海马 NE、血清 IL-1β、TNF-α和 MTL 含量明显降低,下丘脑CRF含量、血清GAS含量升高,有显著性意义(P<0.01或P<0.05);海马5-HT、5-HIAA、DOPAC 和血浆 SS 含量降低,血浆 VIP 含量上升,但均无显著性差异(P>0.05);血清 IL-2、IL-6、CORT 含量及血浆 ACTH 含量均无明显变化。结果表明,夹尾激怒诱发的肝郁模型可能是一种以 HPA 轴紊乱为中心的免疫系统失调及胃肠功能受抑的状态。四方对肝郁模型均有一定的治疗作用,但各方在作用强度和作用环节上有所不同,证明具有部分同质的类方作用于同一相关证,各方的作用在一定范围内具有异中之同和同中之异的关系。本实验探讨了肝郁证与神经-内分泌-免疫网络的关系和夹尾激怒诱发的肝郁模型的部分生物学基础,发现四逆散类方对夹尾激怒大鼠模型(异方同模)在神经-内分泌-免疫网络中的不同作用环节及调节效应。课题为在类方层面上认识中医方-证原理提供有力的实证依据。主题词:四逆散类方; 肝郁; 方证相关; 神经-内分泌-免疫网络