狭叶半夏凝集素结构域表达与功能研究

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半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin,PTA)是一种双结构域(two-domain)的雪花莲凝集素类似的植物凝集素(Galanthus nivalis agglutinin related lectin,GNA-related lectin)。两个结构域有拥有1-2个不同数目的活性糖作用位点(QDNVY),通过重组蛋白体外表达实验发现来自狭叶半夏(Pinellia ternata f.angustata)凝集素的两个结构域均具有凝集素功能,说明在该凝集素中,一个活性糖作用位点即可使凝集素具有相应的功能,实验还证明活性糖作用位点的数目与凝血功能之间没有明显的相关性;通过凝集素抗真菌实验证明,活性糖作用位点的数目跟抑菌力呈正相关。通过在转录水平和蛋白质水平表达研究,证明狭叶半夏凝集素呈组成型表达形式存在在植物体内,且在珠芽和块茎表达量最高,说明珠芽与块茎同为凝集素主要贮藏器官,同时证明狭叶半夏凝集素为非组织特异性蛋白。通过组织定位实验,发现狭叶半夏凝集素两个结构域均以等量方式定位于相同的组织,在植物维管束和表皮表达量较高,结合洋葱表皮亚细胞定位,进一步说明该凝集素具有分泌蛋白的特性,在翻译后随即完成蛋白转运,作为贮藏蛋白存在于珠芽和块茎以及担当防御功能外泌到皮层细胞。论文采用体外表达的方式首次对半夏凝集素进行结构域功能研究。为类似蛋白质功能研究和生产实践提供了理论依据和技术路线。
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