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背景:神经胶质瘤又称为胶质瘤,是脑肿瘤中最常见的恶性肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的50%,病死率较高。胶质瘤细胞的转移和侵袭是其致死的重要原因之一,因此恶性胶质瘤转移侵袭的机制是当前研究的热点,也是临床上非常棘手的问题。微小RNA(Micro RNA,mi RNA)是长度约为22nt的内源性非编码单链RNA分子,能够参与调控蛋白质的生物合成。mi RNA的作用方式主要是与靶序列完全或不完全互补,或是通过抑制下游靶基因的表达,进而调节对m RNA的降解作用以及蛋白质的翻译,从而达到对靶基因表达的负向调控作用。近年来,通过对mi RNA功能研究的不断深入,发现其与肿瘤的发生、发展密切相关。Rab蛋白是一类小分子GTP结合蛋白,属于Ras家族中最大的亚家族。研究表明,Rab蛋白在囊泡运输和细胞间信息传递中发挥着重要的作用。目前已经发现MEK/ERK信号通路的激活是多数肿瘤侵袭和转移的重要因素之一,此信号通路包括Ras小GTP结合蛋白和下游的丝氨酸/苏氨酸激酶Raf-1、MEK1/2丝裂原活化调节激酶和ERK1/2细胞外调节激酶。该通路可以激活转录因子AP-1家族(成员包括c-Jun和c-Fos),而c-Jun和c-Fos可以激活MMP-9的转录。MMP-9属于基质金属蛋白酶家族,主要功能是降解和重塑细胞外基质,在肿瘤转移和侵袭过程中发挥重要作用。目的:本实验室前期mi RNA芯片分析结果显示:经氯毒素(Chlorotoxin,CTX)处理神经胶质瘤细胞U87 MG后,mi R-132的表达量明显增高。在本研究中我们探讨高表达mi R-132对神经胶质瘤细胞迁移、侵袭的影响及其靶基因调控的相关信号通路,进而为神经胶质瘤的治疗提供新的分子靶点。方法:1.传代培养人神经胶质瘤细胞U87 MG,通过脂质体Lipofectamine 2000转染mi R-132 mimics上调mi R-132的表达,并用Real-time PCR方法检测mi R-132的转染效率。2.采用Transwell小室法检测高表达mi R-132对U87 MG细胞迁移、侵袭能力的变化。3.利用Target Scan预测mi R-132的靶基因并用双荧光素酶报告系统验证mi R-132的靶基因。4.利用Real-time PCR及细胞免疫荧光技术检测mi R-132靶基因m RNA和蛋白的表达量。5.Western blotting检测mi R-132过表达后靶基因Rab26的蛋白表达水平及MEK/ERK信号通路相关蛋白的变化。结果:1.mi R-132 mimics通过脂质体成功转染进入U87 MG细胞中,Real-time PCR显示mi R-132的含量明显上升。2.U87 MG细胞转染mi R-132 mimics后迁移和侵袭能力呈明显的下降趋势。3.Target Scan预测出Rab26是mi R-132的潜在靶点,成功构建野生型和突变型的Rab26基因的双荧光素酶报告质粒。4.运用双荧光素酶报告系统验证了Rab 26基因是mi R-132的直接靶点。5.U87 MG细胞中转染mi R-132 mimics后Rab 26的m RNA和蛋白表达都下降。6.Western blotting结果显示转染mi R-132mimics后,迁移侵袭相关蛋白MMP-9表达下降,c-jun(AP-1),p-MEK、p-ERK、p-Raf表达下调。结论:1.高表达mi R-132能够抑制神经胶质瘤细胞U87MG的迁移和侵袭能力。2.mi R-132能够直接靶向Rab26,并抑制其表达。3.过表达mi R-132后神经胶质瘤细胞U87 MG中的MMP-9表达降低,mi R-132可以抑制细胞迁移信号通路MEK/ERK相关蛋白的表达。