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香蕉枯萎病是一种由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysoporumf.sp.cubence,FOC)引起维管束坏死的系统性病害,严重影响了香蕉的生产和发展。目前该病害的防治十分困难,化学防治和农业防治都不能达到理想的效果。筛选香蕉枯萎病菌的拮抗菌,开发微生物杀菌剂对香蕉枯萎病的防治将有重要的意义。本研究通过平板对峙培养法,筛选出了香蕉枯萎病菌的拮抗细菌S-1、C-4;探索了培养条件对细菌生长及拮抗效果的影响;测试了菌株S-1、C-4的抑菌谱和温室防治效果;并利用Biolog系统和16SrDNA序列的同源性等方法对其进行鉴定。具体结果如下:
l、从广东省的6个香蕉种植区(广州、中山、茂名、番禺、深圳、珠海)采集健康香蕉根际土壤,分离出细菌74株。初次筛选到对香蕉枯萎病菌4号小种(FOC4)有拮抗作用的细菌有9株。再次筛选结果表明菌株S-1、C-4对香蕉枯萎病菌1号小种(FOCl)和FOC4的抑制效果最为显著,相对抑制率在76%以上。
2、抑菌谱试验结果表明S-1、C-4菌株对多种病原真菌具有抑制作用,对番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.lycopersici)、玉米弯孢叶斑病菌(Curvularialunata)、胶孢炭疽病菌菌(Colletotrichumgloeosporioidse)、棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporiumf.sp.vasinfectum)、棉花黄萎病菌(Verticilliumdahliae)、小麦赤霉病菌(Gibberellazeae)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)等病原菌菌丝的生长都有抑制作用。
3、室内盆栽试验结果表明S—l、C-4菌株具有良好的温室防效,能明显地降低香蕉枯萎病的发生程度。同时接种拮抗细菌和FOC4后lOd、20d、30d分别调查一次结果,接种30d后的防治效果显著。接种FOC4孢子悬浮液和S—l、C-4接种液的香蕉苗对比只接种FOC4孢子悬浮液的香蕉苗,根部及维管束的褐化程度减弱,腐烂现象明显减轻。
4、室内培养条件的试验结果表明:培养时间、培养基种类、温度、pH值对菌株的生长及活性物质的代谢有着较大的影响。在供试的8种培养基(PDA、LB、YSP、KB、YPGA、LM、NA、PYTG)中,S-1菌株在PYTG或PDA培养基、温度30~32℃、pH值7.8~8.0、振荡培养45~48h时,对FOC4的抑制效果较好;C-4菌株在YPGA或PDA液体培养基、温度32~35℃、pH值7.8~8.0、振荡培养50~52h时,对FOC4的抑制效果较好。
5、Biolog系统鉴定表明,S-1和C-4菌株分别为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)。再经16SrDNA序列的同源性分析,菌株S-1与已报道的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)16SrDNA同源性为100%;菌株C-4与已报道的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)16SrDNA的同源性为99%,进一步印证了Biolog系统鉴定结果的正确性。