论文部分内容阅读
目的:探讨脊髓水平CCL2在大鼠胫骨癌痛发生发展中的作用及其可能机制。
方法:采用Walker256乳腺癌细胞构建大鼠胫骨癌痛模型。雌性SD大鼠(160~180g)随机分为五组(n=8):假手术组(Ⅰ组)、假手术+CCL2中和抗体组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+control IgG组(Ⅳ组)、骨癌痛+CCL2中和抗体组(Ⅴ组)。分别于术后第10~12天,每天1次鞘内注射CCL2中和抗体或controlIgG(10μg/15μl)。于术前1d,术后1d,3d,5d,7d,10d,14d,21d,测定大鼠机械痛敏阈值、热缩足潜伏期及自发性疼痛评分;ELISA法测定大鼠脊髓水平CCL2表达量的变化;免疫荧光染色法检测脊髓背角Iba-1与GFAP平均光密度的改变,免疫荧光双标染色检测脊髓背角CCL2与Iba-1(小胶质细胞特异性标记物)、GFAP(星形胶质细胞特异性标记物)及NeuN(神经元特异性标记物)的共表达情况。
结果:(1)疼痛行为学:与Ⅰ组相比,骨癌痛各组(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)大鼠在术后第5天始出现机械痛觉过敏(P<0.05,P<0.01),第7天始出现自发性疼痛评分升高(P<0.05,P<0.01),Ⅱ组上述指标无明显差别(P>0.05);与Ⅲ组相比,鞘内用药后,Ⅴ组大鼠机械痛敏阈值显著升高(P<0.01),自发性疼痛评分显著降低(P<0.01),Ⅳ组上述指标无明显变化(P>0.05)。各组大鼠热缩足潜伏期之间无明显差异(P>0.05)。(2)ELISA:与假手术组相比,骨癌痛大鼠术后7d,14d,21d脊髓水平CCL2表达量明显升高(P<0.01)。(3)免疫荧光染色法:免疫荧光双标染色发现脊髓背角CCL2与Iba-1和GFAP存在共表达,而与NeuN之间无共表达;免疫荧光发现与Ⅰ组相比,骨癌痛各组(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞数量明显增加,胞体突起增生肥大,呈激活状态,Iba-1,GFAP平均光密度(mean optical density, MOD)值显著升高(P<0.01),Ⅱ组上述指标无明显差别(P>0.05)。与Ⅲ组相比,鞘内用药后,Ⅴ组大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞的活化明显被抑制,Iba-1,GFAP的平均光密度值降低(P<0.01),Ⅳ组上述指标无明显变化(P>0.05)。
结论:(1)胫骨癌痛大鼠脊髓水平CCL2表达量明显上调;鞘内注射CCL2中和抗体,能够部分逆转胫骨癌痛大鼠已产生的痛觉过敏。(2)CCL2在脊髓背角主要表达于小胶质细胞和星形胶质细胞;鞘内注射CCL2中和抗体能抑制胫骨癌痛大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞的活化。提示趋化因子CCL2参与大鼠胫骨癌痛的发生,并且在脊髓水平可能是通过激活胶质细胞发挥作用。