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本文以沙地云杉成熟合子胚为材料,诱导胚性愈伤组织,并继代培养,进而建立分散性好、活力高的悬浮细胞系。为进行沙地云杉的原生质体培养、基因导入及细胞融合等研究提供实验基础。1沙地云杉成熟合子胚诱导的愈伤组织类型有胚性与非胚性愈伤两种。质地松软,表面有光泽的愈伤为胚性愈伤,其余为非胚性愈伤。愈伤组织的诱导率比较高,大部分诱导率在60%以上,但没有添加激素的培养基上不产生愈伤。在2mg/L6-BA和1mg/L2,4-D的浓度配比下,达到最高诱导率,为93.75%。所有胚性愈伤组织在保持和增殖时出现了褐化现象,但是程度不一样:在不加任何激素时,愈伤组织褐化率为100%;在激素配比1mg/L6-BA和0.2mg/L2,4-D时愈伤组织褐化率最小,为16.67%;总体而言2,4-D浓度在0.1mg/L和0.2mg/L时愈伤组织褐化率小,6-BA和2,4-D一起附加时比单个附加时的愈伤组织褐化率小。同样,2,4-D浓度在0.1mg/L和0.2mg/L时愈伤组织胚性保持的好,6-BA和2,4-D一起附加时比单个附加时的愈伤组织胚性保持的好。2沙地云杉胚性细胞悬浮培养生长周期为12d,通过选择,最佳培养条件是:DCR+0.1mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+30g/L蔗糖,pH6.0,接种量3.0%,摇床转速为110r/min,25±1℃、黑暗条件下震荡培养。3动力学研究过程中,细胞鲜重和干重的变化趋势是一致的,延迟期为第0～3d;对数生长期为4～8d;从第9d开始进入稳定期。细胞活力的OD值第4d时达到最大,为0.74;随后开始下降,到第10d时降到最小,为0.34;之后又有所回升。由细胞活力和干重变化曲线得出,继代周期为6～8d。在生长周期内,pH值一直在减小,第1～9d减小幅度比10～12d间要大。NH4+在培养过程中消耗最快,在第10d时已耗尽;总糖的消耗量在3～8d下降最快,NO3-和PO43-的消耗趋势与蔗糖的基本相同,只是总糖的消耗前期与后期比NO3-和PO43-的消耗要快。NO3-的减少率为63.79%,NH4+为100%,蔗糖和PO43-分别为80%和84.62%。由于缺少铵盐,细胞生长从第9d开始进入稳定期。4细胞活力与其它各参数之间在0.05和0.01检验水平下都不相关;而其余的各参数之间在0.01检验水平下都显著相关。细胞干重与其余的各参数之间的都呈负相关。除了细胞活力OD值外,其余个参数与细胞干重的相关系数都在-0.95以上。因此,培养液中不仅是总糖和其它营养元素直接影响细胞的增殖,培养液酸碱性也直接影响细胞的增殖。