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目的:本研究主要通过药物3-MA抑制人腮腺成纤维细胞Hs917.T中的自噬,探讨3--MA对于Hs917.T细胞株放射敏感性的影响及其潜在的作用机制,拟为头颈部放疗的体内模型研究提供一定的理论依据。 方法:⑴Western blot法及GFP-LC3质粒转染法分析不同剂量X射线(选取0、2、4、6、8Gy5个剂量点)作用于Hs917.T细胞对自噬水平的影响;⑵3-MA抑制自噬对Hs917.T细胞放射敏感性的影响及其机制:1、Western blot法验证3-MA对Hs917.T细胞内自噬相关蛋白的抑制效果;2、克隆形成实验分析3-MA联合X线照射对Hs917.T细胞克隆存活率的影响;3、GFP-LC3质粒转染后荧光显微镜下观察3-MA对受照后的Hs917.T细胞自噬凝集簇形成的影响;4、流式细胞术检测3-MA对受照后Hs917.T细胞的凋亡影响;5、Western blot法分析自噬相关蛋白LC3、Beclin1和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化。 结果:①X射线在0~8Gy剂量范围内可诱导Hs917.T细胞自噬水平的上调,且随着剂量的增加自噬水平也相应增加,呈现一定的剂量依赖性,后续实验选用8Gy作为处理剂量。②MTT结果显示2mM3-MA处理24h对Hs917.T细胞无明显毒性作用,同时GFP-LC3质粒转染法及Western blot法提示3-MA(2mM、24h)对自噬抑制效果明显,因此选择3-MA(2mM、24h)作为后续实验研究;克隆形成实验结果显示:Hs917.T单纯照射组和照射联合3-MA组的平均致死剂量D0分别为2.36Gy和1.97Gy,准域剂量Dq分别为1.01Gy和0.93Gy,3-MA对Hs917.T细胞的放射增敏比(SER)为1.20;GFP-LC3凝集簇实验结果显示:3-MA联合电离辐射组相比于单纯照射组Hs917.T细胞内绿色凝集簇明显减少;Annexin V-FITC流式细胞检测结果显示,与单纯照射组相比,3-MA联合照射组明显增加Hs917.T细胞的凋亡;Western blot显示3-MA联合照射组与单纯照射组比较,Hs917.T细胞内的自噬相关蛋白Beclin1表达降低,凋亡相关蛋白Bax表达升高。 结论:电离辐射(X射线)可明显诱导Hs917.T细胞内自噬表达增加;3-MA可明显降低受照后Hs917.T细胞内的自噬表达,提高Hs917.T细胞的放射敏感性,可能与3-MA增加受照后Hs917.T细胞内的凋亡表达相关。