阿那其根提取物对过氧化氢致PC12细胞损伤的影响

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目的:研究阿那其根提取物对过氧化氢致PC12细胞损伤的影响,初步探讨其防治阿尔茨海默病的作用及机理。方法:将阿那其根水、醇提取物作为受试药,按常规培养PC12细胞,采用CCK-8法观察细胞增殖、测定对数生长期、检测阿那其根提取物对细胞增殖的影响。CCK-8法检测不同浓度过氧化氢在不同作用时间内对细胞增殖的影响,并选出最适度损伤时间与浓度,建立过氧化氢导致细胞损伤的实验模型。将细胞随机分为正常对照组、模型组、阿那其根水提物组、阿那其根醇提物组以及阳性对照组。经过CCK-8法检测阿那其根提取物对过氧化氢导致细胞损伤的影响,用Hoechst 33342染料观察细胞形态改变,通过生化比色法求出细胞培养液中LDH、MDA、SOD活力。采取PE-Annexin V染色流式细胞术测出各组细胞早期凋亡率,检测阿那其根提取物对细胞早期凋亡的影响。在激光共聚焦显微镜下,用罗丹明123染料观察各组细胞线粒体膜电位改变。Western Blotting法检测阿那其根提取物对各组PC12细胞中Bcl-2、Caspase-3、Bax蛋白表达的影响。结果:CCK-8法检测结果显示,阿那其根提取物促进PC12细胞增殖,抑止细胞凋亡率的升高。与模型组细胞相比,低、中、高浓度的阿那其根水、醇提取物组细胞活力明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst 33342染色结果显示,低、中、高浓度的阿那其根水、醇提取物组细胞的形态明显区别于模型组,尤其是药物高剂量组细胞形态与数量接近于正常组细胞。流式细胞术检测结果显示,模型组细胞早期凋亡率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),不同浓度给药组细胞的早期凋亡率显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。酶含量测定结果显示,阿那其根提取物显著降低LDH、MDA释放,能够增加SOD活力,恢复PC12细胞损伤。线粒体膜电位检测结果显示,与正常组比较,模型组胞内发出的荧光明显减弱。与模型组相比较,低、中、高剂量的Ap-水、醇提取物组胞内发出的荧光明显增加。蛋白表达检测结果显示,与正常组比较,模型组Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3、Bax蛋白表达增强。与模型组相比,阿那其根提取物组细胞Bcl-2蛋白表达增强,Caspase-3、Bax蛋白表达减弱。结论:阿那其根提取物能够使细胞存活率增加,通过调节氧化应激对过氧化氢诱导的PC12细胞损伤起保护作用。
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