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牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征(BRDC),对养牛业危害严重,每年都使全球的养牛业蒙受重大的经济损失。牛呼吸道疾病综合征多是由应激与一种或数种病毒感染造成的,其中牛腺病毒3型(Bovine adenovirus type3, BAV-3)是引起牛呼吸道疾病的最重要的病原体之一。BAV-3为腺病毒科(Adenoviridae)哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)的成员。牛腺病毒(BAV)感染牛可引发一系列不同的临床症状,包括结膜炎、肺炎、腹泻和多发性关节炎。自从1965年Darbyshire等在英国从健康牛结膜首次分离出牛腺病毒3型以来,美国、加拿大、芬兰、比利时、澳大利亚、土耳其和日本等国均有该病毒感染的报道。BAV-3对犊牛的实验感染表明其对犊牛有致病性,被感染犊牛出现发热和食欲不振等呼吸道病症状及肺脏实变的肉观病变,自然感染BAV-3的犊牛亦发生呼吸道疾病。最近的血清学调查表明BAV-3在牛群中血清阳性率较高,最高可达92.3%。2009年国内首次报道从黑龙江的一头患有呼吸道疾病病牛的鼻腔拭子分离到一株BAV-3,命名为HLJ0955株,在2009年之前我国一直没有BAV-3的相关报道。随后在我国的辽宁省与山东省亦分离到了该病毒。目前,我国对BAV-3的研究尚处起步阶段,国内还没有商品化疫苗与检测试剂盒.腺病毒的六邻体蛋白位于病毒粒子表面,是病毒粒子中含量最高的结构蛋白,约占病毒粒子分子质量的63%,且含有潜在的血清特异性抗原表位,为此本研究选择了六邻体蛋白作为目标蛋白,进行了单抗制备及双抗夹心ELISA的研究,为BAV-3的检测提供相应的技术支持。本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3黑龙江分离株HLJ0955的六邻体蛋白,用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0细胞融合并筛选出14株杂交瘤细胞株。免疫印迹与间接免疫荧光试验表明14株单抗具有良好的反应性。特异性试验表明该单抗不与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛呼吸道合胞体病毒反应。免疫组化试验表明其中一株1F8可以检测实验感染BAV-3的实验动物体内的病原。上述研究为BAV-3抗原表位的进一步鉴定及病原的免疫组化检测奠定了基础。同时,利用抗BAV-3的兔源多克隆体与筛选出的MAb182建立了双抗夹心ELISA,以用于检测BAV-3的病毒抗原。以50份已确定的BAV-3阴性样品的ELISA的OD值为参照,确立了cut-off值为0.29,当OD492值大于0.29时,判定检测样本为阳性；等于或低于该值判定为阴性。特异性实验结果表明该检测方法只针对BAV-3,不与其它导致牛呼吸道疾病的病毒反应；敏感性实验结果显示该方法最低检测为每50μL含10L8TCID50培养的病毒。对102份采自哈尔滨市周边地区的牛鼻腔棉拭子样品进行了检测,结果检出21份阳性样品,阳性率20.6%,表明一部分牛可自然感染BAV-3,并可从鼻腔排出病毒,应引起足够的重视。综上所述,本研究制备了14株针对BAV-3六邻体蛋白的单克隆抗体,其中一株单抗1F8可以用于实验感染动物体内BAV-3的免疫组化检测。同时本研究利用BAV-3的兔源多抗和一株单抗182建立了检测BAV-3病毒抗原的双抗夹心ELISA,对102份牛鼻拭子的检测结果表明,该双抗夹心ELISA可试用于BAV-3的样品检测及病原学调查。本研究为BAV-3的病原学诊断奠定了基础。