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紫薇(Lagerstroemia indica L.)是我国的原产种,集观赏、药用、绿化、环保于一身,具有极大的观赏价值和实用价值。主要分布于我国的黄河以南地区,北京、河北、西安、大连等地也有栽培。生产中获得种苗的方法主要有播种、扦插、压条、分株、嫁接等。对于现存数量较大的品种,通过实生苗生产种苗的效率比较高,但是对于稀有品种,比如说转基因获得的新品种,一般一年内不能收获种子,有的转基因植物甚至不育,即使是可育的其后代也可能发生能性状变异,得到的种苗数量又有限。因此有效的组织培养和扦插对数量较小的优良品种(尤其是转基因品种)进行扩繁获得种苗是较理想的选择。目前虽然有关于紫薇组织培养的报道,但是要想得到健壮的试管苗并成功移栽依然存在许多实际问题。关于紫薇的扦插繁殖也有报道,只是一些零星的经验之谈,没有系统地加以研究、深入分析。该论文从这两个方面入手对紫薇的无性繁殖进行了研究,得到了适合紫薇组织培养的理想培养基和高效的扦插方法,并且进一步剖析了紫薇的生根机理,为紫薇转基因品种的扩繁提供可靠的实验依据。 1用组织培养的方法对紫薇进行扩繁。以紫薇新萌发的嫩茎段为外植体进行组织培养。对外植体的消毒时间进行了优化选择,得到了在75%酒精中消毒5 s之后再转入0.1%HgCl2中浸泡8 min(加入少许吐温)污染率最低的消毒方法。用该方法对外植体消毒的污染率为26.1%,成活率71.7%。并对培养基的成分进行了选择,发现在紫薇芽分化培养基中以柠檬酸铁代替EDTA-Fe更有利于芽的分化和生长。从繁殖系数看,用MS+6-BA2.0 mg/L+KT1.0 mg/L+NAA0.05 mg/L培养基的增殖效果最好;但就分化芽的生长情况来看,MS+6-BA3.0 mg/L+KT1.0 mg/L+NAA0.05 mg/L最有利于其生长。选择生长健壮的芽在1/2MS+IBA0.1 mg/L+NAA1.0 mg/L上的生根率最高。 2分别以紫薇的硬枝和嫩枝为材料,用不同激素处理的插条在不同基质上生根状况各异。研究发现,用ABT200 mg/L浸泡硬枝4小时后于混合基质(草炭灰﹕蛭石﹕珍珠岩=1﹕1﹕2)中的生根状况最好,生根率可达51.418%,平均根数9.443,根系效果指数是2.382;用IBA250 mg/L浸泡嫩枝4小时后于草炭上的生根率可达16.667%,平均根数11.860,根系效果指数是9.958;总之,从生根效果指数来看,嫩枝扦插效果优于硬枝扦插。 3紫薇生根解剖学的研究。以生根插条为材料,通过石蜡切片的方法观察到紫薇生根过程的结构形态变化。研究发现,紫薇插穗为皮层生根,插穗内不存在潜伏的根原基,它的诱生根原基产生于髓射线与皮层交界处,可能由皮层分生组织分化而来。并且插穗生根与愈伤组织的形成有一定的相关性,也就是说,插条愈伤组织的形成及发育对不定根的产生有一定的抑制作用。 4紫薇硬枝扦插生根过程中内源激素的变化。研究发现,紫薇硬枝扦插生根率与茎的基部的IAA含量、IAA/ABA比值和IAA/ZRs比值呈正相关,其中IAA含量与生根率呈极显著正相关,相关度高达0.927;紫薇硬枝扦插生根率与根的基部的与 ZRs和 GA含量呈一定程度的负相关,但不显著,相关系数只有-0.483和-0.360。而紫薇硬枝扦插生根率与其基部ABA含量呈显著负相关,相关系数为-0.781。因此用内源IAA含量作为重要生理指标能够准确地衡量紫薇生根状况。 5生根过程中紫薇硬枝扦条营养物质的变化。研究发现,紫薇硬枝扦条的生根率与插穗内可溶性糖和全氮含量存在一定程度的负相关,即可溶性糖和全氮含量越高,紫薇硬枝生根率越低。紫薇硬枝扦条的生根率与插穗内的可溶性蛋白质和C/N比值呈显著的正相关,插条基部的C/N值越高,插条越容易生根;可溶性蛋白含量越高,插条生根也越容易。 6紫薇硬枝扦插生根过程中PPO和POD活性与插条不定根的形成有密切关系。PPO酶可以催化酚类物质和IAA形成一种辅助生根的复合物,具有促进不定根形成的活性。因此,PPO活性升高促进紫薇插穗生根;同时,POD活性上升有助于合成木质素,所以POD的上升有利于愈伤组织和根原基形成的。POD作用的某些产物可能是不定根发生和发展所必须的辅助因子,促进不定根的形成。