纳米Fe3O4的制备、表面改性及其对蛋白的分离纯化研究

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采用超声预处理技术,在羧甲基葡聚糖-水分散体系中,通过化学共沉淀法制备羧甲基葡聚糖表面改性纳米粒子,并用红外光谱(IR)、透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、振荡样品磁强计(VSM)等对产物进行了表征。实验结果表明:超声预处理方法能明显提高复合纳米粒子的分散性。制得的复合纳米粒子呈球形,分散均匀,平均粒径为50 nm;且保持Fe3O4的晶相结构,在水溶液中的稳定性显著提高;并具有超顺磁性,室温下磁饱和磁化强度为35 emu·g(?)1。将羧甲基葡聚糖改性的磁性复合纳米粒子用于低浓度下牛血清白蛋白(BSA)的吸附/解吸研究,考察了时间、温度、蛋白质浓度、pH值、离子强度对其吸附蛋白质的影响。结果表明表面修饰磁性纳米粒子对BSA的吸附量比裸磁珠对BSA的吸附量提高了一倍。这种对BSA亲和磁性纳米粒子的吸附行为满足Freundlich等温吸附方程,且对离子强度和pH值依赖性强。pH=4.62即接近BSA的等电点时,亲和磁性微球对BSA的吸附量达到最大,吸附率达99.5%。吸附后的BSA用0.5 mol·L(?)1 Na2HPO4解吸,解吸率为89.2%。解析后的BSA能保持原来的结构不变。将牛血清白蛋白抗体与改性磁性纳米粒子表面的羧甲基化葡聚糖偶联,制备了具有核-壳结构的免疫纳米磁性粒子。实验发现:这种免疫葡聚糖磁性纳米粒子形状规整,平均粒径为150 nm,修饰后保持Fe3O4的晶相结构,在水溶液中的稳定。免疫磁性纳米粒子具有特异性,实验将其用于牛血清白蛋白(BSA)的分离和纯化研究。结果表明免疫磁性纳米粒子可直接从牛血清样品中分离出目的蛋白BSA,且非特异性低。免疫磁性纳米粒子对BSA的吸附量为21.57 mg·g(?)1,并具有可再生性。由此可见,免疫磁性有望作为一种快速、经济、简单、高效蛋白分离工具而加以利用。
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