岩豆凝集素的化学修饰与光谱分析;风雨花甘露糖结合凝集素基因的生物信息学分析及其在大肠杆菌中的表达与纯化

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岩豆凝集素(Millettia Dielsiana harms lectin, MDL)寡糖链及部分氮基酸残基的基团特异性化学修饰表明:色氨酸的修饰导致凝血活性完全丧失;而在0.2mol/L甘露糖中进行修饰,凝血活性保持完整,结果表明两个色氨酸参与岩豆凝集素的糖结合位点。糖链氧化、组氨酸和精氨酸残基的修饰对凝血活性无影响;羧基修饰使MDL丧失80%凝血活性,当修饰过程中存在甘露糖时,凝血活性保持完整,表明天冬氨酸或谷氨酸的羧基参与凝集素的糖结合位点的组成。荧光光谱研究表明色氨酸位于相对疏水区;结合甘露糖的岩豆凝集素能淬灭色氨酸的荧光,但最大激发波长位置不变。圆二色谱研究表明,糖链氧化和组氨酸残基的修饰较大程度上改变了分子的构象,而精氨酸残基的修饰对分子结构无影响;荧光淬灭研究表明丙烯酰胺和碘乙酸分别能淬灭MDL中色氨酸残基77%和98%的荧光,而KI几乎不能淬灭MDL的荧光,表明几乎所有的色氨酸位于凝集素近分子表面相对疏水的浅沟或强阴离子区域。
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