论文部分内容阅读
目的:观察针刺“百会”透“曲鬓”对脑出血大鼠脑组织PI3K、p-AKT以及Bax表达的影响,探讨其对脑组织细胞凋亡及神经保护的作用机制。方法:选取健康雄性Wistar大鼠144只,随机分为三组:模型组、针刺组(模型+针刺组)、假手术组,每组48只大鼠。每组再随机分为6h、1d、3d、7d四个亚组,每个亚组12只大鼠,制备脑出血模型。假手术组大鼠接受类似模型组的各项手术操作,但不进行注血。针刺组大鼠在脑出血造模成功后,立即针刺“百会”透“曲鬓”进行治疗。各组大鼠神经功能缺损体征应用Berder son评分法以及Rosenberg评分法进行综合评价;光镜下采用HE染色法对各组大鼠脑组织形态学改变进行观察;各组大鼠脑出血半暗带区细胞凋亡情况应用TUNEL法进行检测;运用免疫组织化学及蛋白免疫印记法分别检测各组ICH模型大鼠不同时间点脑组织中PI3Kp-AKT以及Bax的表达情况。结果:1.针刺组大鼠较模型组大鼠神经功能缺损体征有明显恢复,在1d,3d,7d时针刺组大鼠评分明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.HE染色显示:针刺组出血灶明显小于同时间点模型组,炎性细胞数量较模型组减少,水肿程度低于模型组,脑组织破坏情况远轻于模型组大鼠,细胞形态排列较规整。3. TUNEL法检测结果:针刺组各时段细胞凋亡数量均较模型组减少,术后3d、7d时,针刺组出血灶周半暗带区的TUNEL阳性细胞数明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);4.PI3K免疫组化结果:模型组术后6h时,出血灶周围即出现较高的PI3K阳性细胞表达,至术后1d时达到最高值;针刺组术后各时间点PI3K的阳性细胞数高于模型组, 均有显著性差异(P<0.05)。5.p-AKT免疫组化结果:模型组术后6h时,在半暗带区即有相当数量的p-AKT阳性细胞表达,术后1d时达到高峰;针刺组术后各时段p-AKT阳性细胞表达数量均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)6.Bax免疫组化结果:模型组术后6h时,Bax阳性细胞数即出现表达增多,术后3d时达到最高值;针刺组Bax每个时间点阳性细胞表达数量均低于模型组,各时间点差异均有统计学意义(P<0.05)7.PI3K蛋白免疫印记结果:模型组术后6h时,PI3K蛋白表达量已明显增加,术后1d时达到最高值;针刺组大鼠术后各个时间点脑组织PI3K蛋白的表达量均增多, 差异具有统计学意义(P<0.05)8.p-AKT蛋白免疫印记结果:模型组p-AKT蛋白表达量在术后6h已有较明显增多,于术后1d时达到高峰;针刺组大鼠各时段p-AKT蛋白表达量都高于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05)9.Bax蛋白免疫印记结果:在术后6h时,模型组大鼠即有Bax蛋白明显表达,术后3d时达到高峰;针刺组大鼠各时间点Bax蛋白表达含量均低于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.针刺“百会”透“曲鬓”可以对脑出血模型大鼠神经功能缺损程度评分起到明显的改善作用,减轻其神经功能缺损症状;2. 针刺“百会”透“曲鬓”,可以明显改善脑出血模型大鼠脑水肿程度,减轻炎性细胞浸润,修复神经细胞损伤,从而对其脑组织起到保护作用;3.针刺“百会”透“曲鬓”可以显著降低脑出血模型大鼠半暗带区脑组织凋亡细胞的数量,起到抗细胞凋亡的作用;4.针刺“百会”透“曲鬓”可能通过提高ICH模型大鼠脑出血半暗带区PI3K的表达水平,发挥PI3K的抗细胞凋亡作用,从而使半暗带区神经细胞的调亡数量减少,对脑出血后继发性损伤起到保护作用。5.针刺“百会”透“曲鬓”能够增加ICH模型大鼠脑出血半暗带区p-AKT的表达数量,增强其抗细胞凋亡作用,减少半暗带区神经细胞的调亡数量,从而起到保护脑出血灶周神经元,减少继发性损伤的作用。6.针刺“百会”透“曲鬓”能够降低IC H模型大鼠脑出血半暗带区Bax的表达数量,抑制其促细胞凋亡作用,从而起到保护脑出血灶周围神经细胞,减轻大鼠脑出血后继发性损伤程度的作用。