论文部分内容阅读
目的:研究木犀草素对高脂血症SD大鼠的全面降脂作用并利用表达谱基因芯片探讨木犀草素降脂可能的机制,为木犀草素进一步的开发和利用提供实验依据。方法:基础饲料适应性喂养40只雄性SD大鼠1周,按体重随机分配为正常对照组10只(喂养D12450B 10%脂肪供能饲料)和造模组30只(喂养D12492 60%脂肪供能饲料)。4周后隔夜禁食并断尾取血测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C,模型组TG、TC显著升高(P<0.05)视为造模成功。将30只造模组的高脂血症SD大鼠再随机均分为模型对照组、辛伐他汀对照组和木犀草素干预组并继续喂养D12492饲料,正常对照组继续喂养D12450B饲料。正常对照组与模型对照组每天按10 ml/kg灌胃0.5%的羧甲基纤维素钠(CMC)溶液,木犀草素干预组每天按50 mg/kg灌胃木犀草素,辛伐他汀对照组每天按10 mg/kg灌胃辛伐他汀,干预持续6周后禁食8 h股动脉取血分离血清并颈椎脱臼处死:(1)取肝脏、睾周脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪、腹膜后脂肪并称重,估算肝系数、体脂率,取部分睾周脂肪进行HE染色并观察其病理变化,检测血清中血脂四项(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、载脂蛋白(Apo-A1、Apo-B)。(2)取部分肝脏组织进行HE染色并观察其病理变化,检测血清肝功能指标(AST、ALP、ALT),检测肝脏匀浆中抗氧化指标(SOD、GSH-Px、MDA、CAT),检测肝脏中三个与脂质合成有关的酶(FAS、DGAT、HMG-CoA)的含量,检测三个与脂质分解代谢有关的酶(FAβO、HL、CYP7A)的含量。(3)采用表达谱基因芯片对肝脏RNA进行差异基因筛选,利用GO和KEGG分析,选取显著富集且与脂代谢相关的部分差异基因进行qPCR验证。结果:(1)模型对照组相比于正常对照组,体重、肝系数、体脂率等一般性指标和血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高,血清HDL-C、Apo-A1含量明显降低(P<0.05),Apo-B升高但差异无统计学意义,脂肪细胞体积普遍增大,横截面积增加;与模型对照组相比,木犀草素干预组和辛伐他汀对照组的体重、肝系数、体脂率、血清TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.05),辛伐他汀对照组肝湿重显著降低(P<0.01),Apo-A1升高且Apo-B降低但差异均无统计学意义,脂肪细胞横截面积降低且形态逐渐均一;与辛伐他汀对照组相比,木犀草素干预组的一般性指标、血脂四项及载脂蛋白水平均无统计学意义。(2)与正常对照组相比,模型对照组细胞内出现大量空泡样脂滴(P<0.01),血清肝功能指标AST、ALP、ALT明显提高(P<0.05),肝匀浆中抗氧化酶CAT含量明显降低且脂质过氧化物MDA含量明显升高(P<0.05),肝脏中FAS、DGAT和HMG-CoA还原酶含量显著提高(P<0.01),FAβO、HL、CYP7A含量显著降低(P<0.01);与模型对照组相比,木犀草素干预组和辛伐他汀对照组肝脏内脂滴变小,肝窦结构逐渐清晰,血清ALP、ALT含量明显降低(P<0.05),AST含量降低但无统计学意义,肝匀浆中抗氧化酶CAT含量明显升高(P<0.05),脂质过氧化产物MDA含量显著降低(P<0.01),肝匀浆中FAS、DAGT、HMG-CoA含量均明显降低(P<0.05),FAβO、HL、CYP7A含量均明显升高(P<0.05);与辛伐他汀对照组相比,木犀草素干预组MDA含量较高且CAT含量较低但均无统计学意义,HMG-CoA显著降低(P<0.01)且CYP7A含量显著提高(P<001)。(3)表达谱芯片结果显示,木犀草素干预组与模型对照组相比,有451个差异基因,其中显著性上调的116个,显著性下调的335个,显著富集于GO生物学过程和KEGG分析中的有68个共性差异基因,选择4个与脂代谢有关基因进行qPCR验证,qPCR和基因芯片结果均共同显示ACSL3、DHCR7、GPAM基因表达有所下调,其中ACSL3、DHCR7基因表达明显降低且CYP7A1基因表达明显升高(P<0.05)。结论:木犀草素对高脂血症SD大鼠的血脂水平、脂肪细胞的形态改变、肝脏脂肪变性、肝功能等均有明显的改善作用,对抗氧化水平和脂质代谢相关酶活性有很好的调节作用,与辛伐他汀相比,其对高脂血症SD大鼠的一般性肥胖指标、血脂水平、组织病理变化、肝功能及抗氧化水平方面差异无统计学意义,对脂代谢相关酶的调节作用可能更好,可进一步研究和开发作为新型降脂的天然植物化学物。基因芯片和qPCR结果表明木犀草素可能通过调节肝脏中ACSL3、DHCR7、GPAM、CYP7A1等相关脂代谢基因的表达来参与氧化还原、胆固醇—胆汁酸转化、胆固醇的合成及细胞对脂肪酸的摄取等多个生物学过程,从而达到改善高脂血症SD大鼠脂代谢的作用。